doctoralThesis
Infecções fúngicas sistêmicas em Unidade de Terapia Intensiva : diagnóstico e aplicação da hemopexina em modelos biológicos in vitro
Registro en:
ROCHA, Ana Paula Santiago. Infecções fúngicas sistêmicas em unidade de terapia intensiva: diagnóstico e aplicação da hemopexina em modelos biológicos in vitro. 2019. Tese (Doutorado em Biologia de Fungos) – Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2019.
Autor
ROCHA, Ana Paula Santiago
Institución
Resumen
A incidência de infecções nosocomiais ou IRAS (Infecções Relacionadas à Assistência à Saúde) por fungos tem aumentado significativamente nas últimas décadas, acarretando altos índices de mortalidade nas Unidades de Terapia Intensiva. Esses índices, por sua vez, se tornam mais expressivos quando tratamos de um grupo particular de indivíduos, ou seja, pacientes imunocomprometidos. Desta forma, estas infecções podem desencadear respostas imunológicas no hospedeiro, o qual necessita de células específicas para debelar o agente etiológico do processo infeccioso. Assim, o trabalho teve como objetivo determinar a atividade da hemopexina frente a neutrófilos e fungos em modelo biológico in vitro. Para os ensaios, foram obtidos 56 isolados fúngicos de pacientes internados em unidade de terapia intensiva de dois hospitais públicos da cidade do Recife-PE. Foi realizada a detecção da hemopexina no soro dos pacientes e indivíduos sadios, além da cultura de células dos neutrófilos para o ensaio de fagocitose in vitro. Os ensaios foram realizados frente a espécies de Candida albicans, C. tropicalis, C. glabrata e Kodamaea ohmeri, onde foi cauculado o índice de fagocitose (%) e, a contagem do CFU (unidade formadora de colônia), para verificação da atividade da molécula frente aos neutrófilos e fungos, em diferentes concentrações da hemopexina. Foram isoladas 17 cepas de Candida albicans (30,35%); 17 C. tropicalis(30,35%); 9 C. parapsilosis (16%); 7 Cryptococcus neoformans (12,5%); 4 Candida glabrata (7,14%); 1 Kodamaea ohmeri (8,92%); 1 Candida norvegensis (8,92%). A análise dos neutrófilos mostrou que dos 56 (100%) pacientes com infecção fúngica sistêmica, 42 (75%) apresentaram neutropenia. Enquanto que 14 (25%) apresentaram discreta neutrofilia. Além disso foi observado que nas diferentes concentrações empregadas da hemopexina de [0 µg/mL], [1 µg/mL], [0,5 µg/mL], [0,25 µg/mL], [0,125 µg/mL], [0,062 µg/mL], [0,031 µg/mL] e [0,015 µg/mL], a fagocitose/interação ocorreu em todas elas. Nos isolados de Candida glabrata, Kodamaea ohmeri e Candida albicans, foi observado que a fagocitose melhora na presença da hemopexina, a medida que a concentração aumenta, visto que os ensaios apresentaram diferenças significativas (p<0,05). No ensaio da unidade formadora de colônia (CFU) apresentaram diferenças significativas (p<0,05) nos ensaios de fagocitose para Kodamaea ohmeri e Candidia glabrata, onde apresentaram diferenças significativa (p<0,05). Portanto, os níveis reduzidos de hemopexina sérica, pode ser um indicativo de quadro infeccioso em pacientes grave, culminando em um mal prognóstico para o mesmo; ademais, foi visto nos ensaios in vitro, que a presença da hemopexina proporcionou uma melhora na fagocitose nos neutrófilos frente as espécies de Candida albicans, Kodamaea ohmeri e Candidia glabrata. CNPq The incidence of nosocomial infections or IRAS (Infections Relating to Health Care) by fungi has increased significantly in recent decades, leading to high mortality rates in the Intensive Care Units. These index, in turn, become more expressive when we treat a particular group of individuals that is immunocompromised patients. Thus, these infections can trigger immune responses in the host which requires specific cells to clear the etiologic agent of the infectious process. Thus, the work aims to determine the activity of hemopexin against neutrophils and fungi in a biological model in vitro. For the tests 56 fungal isolates were obtained from patients admitted to an intensive care unit of two public hospitals in the city of Recife-PE. Detection of serum hemopexin from patients and healthy subjects was carried out in addition to neutrophil cell culture for in vitro phagocytosis assay. The assays were carried out against Candida albicans, Candida tropicalis, Candida glabrata and Kodamaea ohmeri species, where the phagocytosis index (%) and CFU (colony forming unit) counts were performed to verify the activity of the molecule front to neutrophils and fungi, in different concentrations of hemopexin. 17 Candida albicans (30.35%) were isolated; 17 C. tropicalis (30.35%); C. parapsilosis (16%); 7 Cryptococcus neoformans (12.5%); 4 Candida glabrata (7.14%); 1 Kodamaea ohmeri (8.92%); 1 Candida norvegensis (8.92%). Neutrophil analysis showed that of the 56 (100%) patients with systemic fungal infection that 42 (75%) presented neutropenia and 14 (25%) presented mild neutrophilia. In addition it was observed that at different concentrations of hemopexin of [0 μg / ml], [1 μg / ml], [0.5 μg / ml], [0.25 μg / ml], [0.125 μg / ml] , [0.062 μg], [0.031 μg] and [0.015 μg], phagocytosis and interaction occurred in all of them. In the isolates of Candida glabrata, Kodamaea ohmeri and Candida albicans, it was observed that phagocytosis improves in the presence of hemopexin, as the concentration increases, since the tests presented significant differences (p <0.05). In colony forming unit (CFU) test there were significant differences (p <0.05) in phagocytosis assays for Kodamaea ohmeri and Candida glabrata where they showed significant differences (p <0.05). Therefore, reduced levels of serum hemopexin may be indicative of an infectious condition in severe patients, culminating in a poor prognosis for hemopexin; In addition it was found in the in vitro assays that the presence of hemopexin provided an improvement in phagocytosis in neutrophils against the species of Candida albicans, Kodamaea ohmeri and Candidia glabrata.