Se evaluó la factibilidad de aplicar una prueba de PCR para el diagnóstico y tipificación molecular del virus de la leucosis enzoótica bovina (VLB), directamente desde muestras de leche. Se analizó un total de 40 muestras de estanque predial, 33 de las cuales fueron seropositivas a una prueba de ELISA. El PCR confirmó la presencia del virus en el 100% de los estanques seropositivos, mientras que en las muestras seronegativas no se obtuvo una banda de amplificación. El posterior análisis de estas muestras mediante RFLP permitió identificar la presencia de 2 de los 3 subgrupos conocidos de variantes genéticas del virus. La aplicación de esta prueba en 10 animales de un predio permitió confirmar la presencia de más de una variante genética dentro del mismo predio, sugiriendo la probable reinfección de este predio con otras cepas del virus. Es necesario destacar que este trabajo constituye el primer reporte de la aplicación de una prueba de PCR-RFLP para la detección y tipificación del VLB directamente desde muestras de leche. De esta forma, la técnica de PCR descrita se puede utilizar no sólo como complemento al diagnóstico del VLB, sino también como una forma conveniente de realizar la tipificación del virus en una zona determinada o incluso a nivel de país, lo cual proporciona una forma rápida y conveniente de estudiar la epidemiología y distribución de la infección del VLB en nuestros rebaños.