Tesis
Estudos biofísicos e in vivo de moléculas ligantes de nucleossomo
Fecha
2020-06-24Registro en:
TELES, Kaian Amorim. Estudos biofísicos e in vivo de moléculas ligantes de nucleossomo. 2020. 113 f., il. Tese (Doutorado em Patologia Molecular)—Universidade de Brasília, Brasília, 2020.
Autor
Teles, Kaian Amorim
Institución
Resumen
A modulação da cromatina é feita em grande parte por Moléculas Ligantes de Nucleossomo (NBMs) que atuam interagindo com a superfície do nucleossomo, alterando a arquitetura da cromatina. Portanto, foi avaliado se Peptídeos Ligantes de Nucleossomo (NBPeps) seriam capazes de interagir com a superfície do nucleossomo diretamente e modular a cromatina, induzindo desfechos fenotípicos na célula. Para entender como NBPeps afetam a estrutura do nucleossomo, foram realizados diversos ensaios bioquímicos, que indicaram que NBPeps diferentes afetam de forma específica a estrutura do complexo, apesar de sítios de ligação semelhantes. Ensaios realizados em cultura de células mostraram que os NBPeps são captados por células Hela através de mecanismo ativo e apresentam toxicidade seletiva
para células Hela, quando comparadas com células CCD10595K. Usando zebrafish (Danio rerio) como modelo animal demonstramos que NBPeps podem atingir o ambiente nuclear em eritrócitos de zebrafish adultos, além disso,penetram diferentes tecidos diferente da larva do peixe e induzem alterações fenotípicas em embriões, causando alterações no desenvolvimento, inibindo a produção de melanócitos, alterando a taxa de eclosão, e apresentam uma baixa taxa de letalidade. Nós concluímos que NBPeps causam desfechos fenotípicos em embriões de zebrafish, apesar de ter o sítio de ligação semelhante. Nossos resultados sugerem que NBPeps podem ter funções terapêuticas importantes. Também foi feita uma revisão sobre os impactos de lipídios no ambiente nuclear com ênfase na modulação da cromatina, foi discutindo o possível papel do nucleossomo como reservatório de lipídeos no núcleo e seu papel na modulação da cromatina. Além disso, foi investigado a capacidade de um NBPeps (H4pep) em induzir separação de fase in vitro. Foi feito ensaio de gota, mostrando que H4pep precisa de DNA para criar a separação de fase, também foi demonstrado que o complexo DNA:H4pep em altas concentrações pode
alterar o estado de separação de fase, criando uma separação do tipo gel-liquida. Realizando o ensaio de resistência ao sal, foi demonstrado que H4pep separa de fase em condições fisiológicas de sal. A relevância biológica desses dados ainda não foi determinada.