Tesis
Atividade antitumoral de nanopartículas de maghemita associada ao citrato de ródio (II) em adenocarcinoma de próstata in vitro
Fecha
2020-07-07Registro en:
LOIOLA, Diogo de Souza. Atividade antitumoral de nanopartículas de maghemita associada ao citrato de ródio (II) em adenocarcinoma de próstata in vitro. 2020. 71 f., il. Dissertação (Mestrado em Biologia Animal)—Universidade de Brasília, Brasília, 2020.
Autor
Loiola, Diogo de Souza
Institución
Resumen
A próstata é uma glândula tubo alveolar. A principal função da próstata adulta é produzir componentes importantes do fluido seminal. A nanobiotecnologia surge como ferramenta multidisciplinar para resolver diversos problemas encontrados em várias áreas do conhecimento. Na saúde, para aplicações farmacológicas, a faixa de tamanho destas nanopartículas varia de 5 a 100 nm. Estudos recentes comprovaram que o agente inorgânico citrato de ródio, quando associado à nanopartículas de maghemita (Magh-Rh2(H2cit)4), possui estabilidade coloidal e atividade antitumoral em células de câncer de mama pela fragmentação do DNA. O objetivo do trabalho foi avaliar a atividade citotóxica do citrato de ródio II associado à NPs de maghemita (Magh-Rh2(H2cit)4) em células DU-145 in vitro. As linhagens celulares escolhidas para o desenvolvimento do projeto foram DU-145 e HNTMC. A caracterização da forma, morfologia, tamanho e fluorescência da nanopartícula foi investigada usando microscópio eletrônico de varredura (MEV), microscópio eletrônico de transmissão (MET), microscópio de fluorescência e espectrofluorimetria. A estabilidade da partícula foi avaliada no equipamento Zetasizer Nano ZS, aferido o diâmetro hidrodinâmico, potencial zeta e índice de polidispersão. Para as análises da capacidade anti-tumoral da Magh-Rh2(H2cit)4 foi ultilizado o teste de viabilidade celular por exclusão com azul de tripan, alterações morfológicas por MEV, alterações ultraestruturais por MET e internalização por meio de microscopias de fluorescência e MET. Para a identificação do tipo de morte celular (necrose ou apoptose) e alterações morfológicas foi ultilizado citometria de fluxo. Após três meses da síntese da NP o pH médio foi de 7,25. O diâmetro hidrodinamico médio foi de 125,15, o potencial zeta de superfície foi de –39,41 mV, com característica monodispersa com indice de polidisperssão 0,210. Esses dados revelam que a NP é estável, pois ela não sofre alterações consideráveis nos parâmetros avaliados ao longo do tempo, estes valores são próximos aos encontrados em trabalhos anteriores. O tamanho das NPs Magh-Rh2(H2cit)4 é um parâmetro importante a ser determinado, pois pode influenciar em sua atividade antitumoral. Os resultados obtidos por MET foram que a NP Magh-Rh2(H2cit)4 possui a característica de formação de grumos e que apresenta um tamanho de aproximadamente 15 nm. Por MEV foi possível observar a formação de aglomerados similar aos visualisados por MET, e confirmar a presença de ferro e ródio, por meio da ferramenta EDS. A análise de fluorescência no espectrofluorimetro revelou que a Magh-Rh2(H2cit)4 possue fluorescência excitada em 555 nm. O teste de viabilidade celular de exclusão por azul de tripan revelou a dosagem IC 50 de 400 μM. As alterações morfológicas por meio de MEV mostrou que em função dos tratamentos há uma redução dos prolongamentos celulares e alterações na superficie das células. O ensaio de MET mostrou que as NPs são internalizadas e permanecem em vesículas no citoplasma. Por meio de citometria de fluxo foi possível constatar que a morte celular se dá por necrose e apoptose, sendo a apoptose responsável por cerca de 75% da morte total. As análises indicam real potencial antitumoral da Magh-Rh2(H2cit)4 em células de adenocarcinoma de próstata, ainda, a NP por possuir fluorescência é uma promissora ferramenta de diagnóstico, no entanto, ainda é necessário outros estudos, principalmente in vivo.