Tesis
Isolamento e caracterização molecular do vírus da cinomose canina, análise de antivirais e produção de uma proteína M recombinante
Fecha
2021-08-18Registro en:
COSTA, Vivaldo Gomes da. Isolamento e caracterização molecular do vírus da cinomose canina, análise de antivirais e produção de uma proteína M recombinante. 2021. 152 f., il. Tese (Doutorado em Biotecnologia e Biodiversidade)—Universidade de Brasília, Brasília, Brasília, 2021.
Autor
Costa, Vivaldo Gomes da
Institución
Resumen
O canine distemper virus (CDV), gênero Morbillivirus, tem emergido e sido reconhecido
como um patógeno altamente contagioso e letal de cães domésticos (Canis familiaris). CDV
também infecta e ameaça uma grande variedade de animais selvagens, incluindo, por
exemplo, as famílias Canidea (cães selvagens, raposa, lobo, cão-guaxinim), Mustelidae (furão,
gambá, visom, lontra) e Procyonidae (guaxinim, quati). Estudos sobre o CDV são necessários
por conta das diversas lacunas envolvendo o assunto, entre as quais estudos de prevalência e
caracterização molecular, terapias antivirais e produção de insumos laboratoriais para o
diagnóstico. Dessa forma, o presente estudo foi realizado e está constituído em seis capítulos.
No primeiro capítulo foi realizada a revisão bibliográfica envolvendo a temática em questão. O
segundo capítulo se refere à combinação dos dados obtidos do inquérito molecular, incluindo
também os dados da literatura sobre dectecção molecular e sorológica do vírus nas diversas
regiões do mundo. Embora este capítulo tenha sido publicado na forma de meta-análise,
destaca-se a inserção dos nossos dados experimentais no estudo, permitindo a geração de
dados mais robustos quanto à frequência de positividade viral, juntamente com a análise de
diversas variáveis potencialmente envolvidas com o fator infecção viral. Ainda em relação ao
segundo capítulo, frisa-se que o mesmo envolveu a coleta de amostras biológicas de cães com
suspeita clínica de cinomose, procedentes do município de Jataí-Goiás. Em suma, houve 34%
(48/141) de positividade para o RNA viral nas amostras. Essas amostras também serviram de
base para a realização dos capítulos três e quatro. O terceiro capítulo envolveu o isolamento e
sequenciamento completo do CDV. Para tanto, pela primeira vez foram desenvolvidos dezenas
de primers que permitiram flanquear todo o material genético. Assim, houve sucesso na
amplificação e sequenciamento completo de uma amostra (JA88/20, 15,624 nt, GenBank:
MW460905). Interessantemente, a linhagem isolada se separou num ramo e formou um
subgenótipo dentro do genótipo América do Sul-I/Europa. No quarto capítulo, as amostras
laboratorialmente positivas para o CDV, foram testadas quanto à amplificação dos genes
estruturais M (1008 nt), F (1989 nt) e H (1824 nt). Mediante a utilização de novos primers, foi
obtido sucesso na amplificação de quatro amostras (4/48). A partir da caracterização molecular
destes genes estruturais, foi observada a circulação na região de uma única linhagem durante
o período de estudo. Surpreendentemente, os sequenciados revelaram assinaturas
moleculares únicas dos isolados no local. O quinto capítulo está relacionado à dinâmica
molecular das proteínas M e N, juntamente com o fornecimento de conhecimentos a respeito
da geração de drogas antivirais. Os resultados obtidos de dinâmica molecular mostraram que
os modelos gerados são de alta qualidade. A partir destes modelos, foi verificado que os
resíduos aminoacídicos considerados chave, das proteínas M e N, estão em local acessível,
representando assim excelente sítio para a ancoragem de moléculas com potenciais antivirais.
Finalmente, no sexto capítulo a proteína M foi expressa em Escherichia coli (BL21) e
purificada. Também houve sucesso no emprego da proteína recombinante como substrato no
ELISA. Os dados, mostraram que houve acurácia laboratorial na distinção entre amostras IgG
anti-CDV positivas e negativas. Em síntese, a proteína recombinante produzida confirma nossa
hipótese referente ao seu emprego em ensaios de imunodetecção.