Gossypol, un disesquiterpeno policíclico natural, abundante en semillas de algodón, es un eficiente bloqueador de la actividad funcional del transportador de hexosas GLUT1 en eritrocitos humanos. Para caracterizar el mecanismo de la inhibición, en esta tesis analizamos el efecto de gossypol sobre la unión de citocalasina B a GLUT1, desarrollamos ensayos de transporte de D-glucosa en eritrocitos humanos en condiciones infinito-cis, además de estudios de perturbación de la fluorescencia intrínseca del transportador en membranas aisladas y en preparaciones del transportador purificado y reconstituido en proteoliposomas. Por otro lado, realizamos cálculos de reconocimiento molecular (“docking”) de gossypol sobre un modelo teórico para la estructura terciaria de GLUT1. El desplazamiento de citocalasina B por gossypol resultó ser de carácter no competitivo, lo cual indica que el sitio de unión para gossypol en GLUT1 es distinto al sitio de unión para citocalasina B. Asimismo, gossypol apagó la fluorescencia de GLUT1 y a la vez, aumentó la exposición de residuos de triptófano medido por el apagamiento por yoduro de la fluorescencia del transportador. Estos efectos de gossypol fueron saturables y específicos, pues apogossypol, un análogo estructural carente de los grupos aldehídos en las posiciones 8 y 8’, fue incapaz de alterar la unión de citocalasina B o la fluorescencia del transportador. A su vez, los ensayos de transporte mostraron que gossypol no alteró la afinidad del sitio de unión externo para D-glucosa. Mediante los cálculos de reconocimiento molecular se identificó un posible sitio de unión para gossypol accesible exofacialmente, en el entorno de Lys 114 y diferente al sitio de unión externo para D-glucosa. Este resultado sugiere que gossypol inhibe al unirse a este sitio externo estabilizando la conformación del transportador que mira hacia dentro de la célula.Gossypol, a natural polycyclic disesquiterpene found in cotton seeds, is an efficient blocker of the functional activity of the hexose transporter GLUT1 in human erythrocytes. In order to characterize the mechanism of the inhibition, in this Thesis we analyzed the effect of gossypol on the binding of cytochalasin B to GLUT1, developed D-glucose transport assays in human erythrocytes in infinite-cis conditions and quenching studies of the intrinsic fluorescence of the transporter in isolated membranes and preparations of purified transporter and reconstituted in proteoliposomas. On the other hand, we made calculations of molecular recognition (“docking”) of gossypol over a theoretical model for the tertiary structure of GLUT1. The displacement of cytochalasin B by gossypol was noncompetitive, which indicates that the binding site for gossypol in GLUT1 is different from the binding site for cytochalasin B. Furthermore, gossypol quenched the GLUT1 fluorescence, and also increased the exposition of the tryptophan residues as sensed by the quenching by iodide of the fluorescence of the transporter. These effects of gossypol were saturable and specific, because apogossypol, a structural analog devoid of the aldehydes groups 8 and 8’, was unable to alter to the binding of cytochalasin B or the fluorescence of the transporter. Likewise, the transport assays showed that gossypol did not alter the affinity of the external binding site for D-glucose. By means of the calculations of molecular recognition (“docking”) a possible exofacially accessible binding site for gossypol was identified, in the surroundings of Lys 114 and different from the external binding site for D-glucose. These results suggest that gossypol inhibits by binding to this external site by stabilizing the inward-facing conformation of the transporter.