Estandarización de un protocolo para la obtención de células diferenciables a multilinaje por medio de estrés químico

Abstract

Las células diferenciables a multilinaje resistentes al estrés (Muse) son una población celular descubierta en el 2010, que está presente en los distintos tejidos mesenquimales. Por su pluripotencialidad, capacidad de integración tisular y baja tumorigénesis, las células Muse prometen ser una forma de tratamiento eficiente en el campo de la medicina regenerativa para diversas enfermedades. Sin embargo, la mayoría de protocolos establecidos para su aislamiento involucran el uso del marcador celular SSEA-3 con la técnica de clasificación de células activada por fluorescencia (FACS), que requiere el uso de un citómetro de flujo que no es un equipo de rutina. El propósito de esta investigación fue verificar la existencia de células tipo Muse en rata y estandarizar un protocolo para su obtención sin utilizar la técnica de FACS. Se partió de un cultivo de células madre mesenquimales (MSC) que fueron sometidas a 4, 8 y 12 horas de incubación con tripsina a largo plazo (ITLP). El tiempo de 8 horas de ITLP demostró ser el más apropiado debido a que se lograba aislar las células tipo Muse de las MSC, sin perjudicar su crecimiento. La obtención de células tipo Muse se confirmó mediante una caracterización por inmunocitoquímica, donde los cúmulos y células resistentes al estrés demostraron la presencia del marcador SSEA-3. El protocolo establecido en este documento representa un método más asequible y reproducible que sirve como punto de partida para llevar a cabo más estudios con esta población celular.

Multi-lineage stress-enduring (Muse) cells are a cell population that was discovered in 2010 that is present in the different mesenchymal tissues. Because of their pluripotency, tissue integration capacity and low tumorigenesis, Muse cells promise to be a form of efficient treatment in the field of regenerative medicine for various diseases. However, the majority of established protocols for their isolation involve the use of the SSEA-3 cell marker along with the fluorescence-activated cell sorting (FACS) technique, which requires the use of a flow cytometer that is not a routine equipment. The purpose of this research was to verify the existence of Muse-type cells in rats and to standardize a protocol for their collection without using the FACS technique. The starting point was a culture of mesenchymal stem cells (MSC) that underwent 4, 8, and 12 hours of long-term trypsin incubation (ITLP) The 8 hour time period proved to be the most appropriate due to it being able to isolate the Muse-type cells from the MSC, without hampering their growth. The extraction of Muse-type cells was confirmed through characterization by immunocytochemistry, where the clusters and stress resistant cells exhibited the presence of the SSEA-3 marker. The protocol established in this document represents a method that is more accessible and replicable that functions as a starting point from which to perform further studies with this cell population.