Función de la proteína Orange (OR) en la producción y acumulación de β-caroteno en raíces de yuca (Manihot esculenta Crantz)

Abstract

El desarrollo de nuevos cultivares de yuca con alto contenido de carotenoides hace parte de una estrategia para combatir la deficiencia de vitamina A gracias a su amplio consumo a nivel mundial. Orange (OR) y fitoeno sintasa (PSY) son proteínas reguladoras en la producción de carotenoides, pero la función de OR, así como su relación con PSY, no ha sido estudiada en yuca. El objetivo de este trabajo fue estudiar la función de la proteína OR en la producción de β-caroteno en raíces de yuca y su relación con PSY. Para esto se realizó un análisis bioinformático para identificar genes codificantes de OR en yuca, y posteriormente se llevó a cabo un estudio de expresión de los genes detectados en raíces de un genotipo de yuca blanca (60444) y dos genotipos de yuca amarilla (GM5309-57 y GM3736-37). Los datos se analizaron mediante un análisis univariado de varianza y se utilizó una prueba de comparación de medias Dunnett (p˂0.05) con el programa SAS (v9.3). Los resultados mostraron la presencia de cuatro genes hipotéticos OR con porcentajes de identidad con Arabidopsis thaliana entre 65,8 y 76,3%. El nivel de transcritos de los genes OR permanecieron constantes, mientras que se encontró una mayor acumulación de proteína OR en los genotipos amarillos. Asimismo, se observó una sobreexpresión de 3,7 veces del gen PSY1 y una disminución de 4,7 y 1,6 veces para NCED y BCH, respectivamente, lo cual podría relacionarse con un posible mecanismo de atenuación del catabolismo del β-caroteno promovido por OR. Mientras que se encontraron diferencias significativas (p˂0.05) en los genotipos amarillos en comparación con el blanco para el contenido de carotenos, proteína OR y expresión génica de PSY1 y NCED, el gen BCH presentó diferencias significativas solo en uno de los genotipos amarillos. Los resultados obtenidos invitan a futuras investigaciones enfocadas al mejoramiento del contenido de carotenoides en la yuca.

The development of new cassava cultivars with high concentration of carotenoids is part of a strategy to combat vitamin A deficiency due to its wide consumption worldwide. Orange (OR) and phytoene synthase (PSY) are regulatory proteins in the production of carotenoids, but OR function, as well as its relationship with PSY, has not yet been studied in cassava. The aim of this work has been the study if the OR protein function upon the production of β-carotene in cassava roots, as well as its relationship with PSY protein. A bioinformatic analysis was carried out to identify cassava OR genes, and a subsequent expression study of the detected genes in roots of one white (60444) and two yellow (GM5309-57 and GM3736-37) cassava genotypes was conducted. Data was analyzed with a univariate analysis of variance and a Dunnett mean comparison test (p˂ 0.05) with the SAS program (v9.3). Results showed the presence of four hypothetical OR genes with identity percentages with Arabidopsis thaliana between 65.8 and 76.3%. The transcripts levels of the OR genes remained constant, while a higher accumulation of OR protein was found in the yellow genotypes. Likewise, a 3.7-fold overexpression of PSY1 and a 4.7- and 1.6-fold decrease for NCED and BCH were observed, respectively, which could be related to a possible mechanism of attenuation of the catabolism of β-carotene promoted by OR. Whereas significant differences (p˂ 0.05) were found in yellow genotypes compared to white for carotene content, protein OR and gene expression of PSY1 and NCED. the BCH gene presented only significant differences in one of the yellow genotypes. These results encourage further research aiming to carotenoids enhancement in cassava.