Evaluación de la infectividad de rotavirus (ECwt) en vellosidades intestinales de ratones adultos ICR, tratados con inhibidores de NF-kB.

Abstract

Los rotavirus causan gastroenteritis aguda con gran impacto en la morbilidad y mortalidad de la población infantil. La estrategia terapéutica a nivel mundial utilizada hasta el momento es la vacunación, pero no asegura que los síntomas desaparezcan completamente. Por tal razón, en el Laboratorio de Biología Molecular de Virus de la Universidad Nacional de Colombia se investiga sobre las interacciones del rotavirus y la célula huésped, evaluando con fármacos la modulación de moléculas celulares como ROS, NF-kB, PPARγ y COX-2 entre otras, como promisorio mecanismo de mitigación de la infección. Por consiguiente, en este trabajo se evaluó la infección por rotavirus (ECwt) en vellosidades intestinales aisladas de ratón ICR tratadas con inhibidores específicos de NF-kB como curcumina, dietilcarbamato y dietil-maleato, analizando la variación en la expresión de está y la infección por técnicas de ELISA, inmunofluorescencia y Western Blotting. Se encontró que la expresión de la proteína NF-kB medida en intensidad media de fluorescencia y los antígenos virales, incrementaban con la infección, pero al tratar con los inhibidores la expresión de la proteína disminuye al igual que los porcentajes de absorbancia del antígeno viral. Las vellosidades aisladas de ratón ICR al ser inoculadas in vitro con el rotavirus ECwt, incrementan la expresión de la proteína NF-kB y de proteínas relacionadas en las vías proinflamatorias, tales como PPARγ y COX-2 además de los niveles de ROS. Por otro lado, el uso de inhibidores de NF-kB tales como curcumina, dietil-carbamato y dietil-maleato disminuyen la expresión de estas proteínas, como también los niveles de ROS y reduce la producción de antígenos virales.

Rotaviruses cause acute gastroenteritis with great impact on the morbidity and mortality of children. The worldwide therapeutic strategy used so far is vaccination, but it does not ensure that the symptoms disappear completely. For such a motive in the Laboratory of Molecular Biology of Virus of the National University of Colombia is investigating between interactions of the rotavirus and the host cell, evaluating the modulation of cellular molecules with reagents such as ROS, NF-kB, PPARγ and COX-2 among others, as a promising mechanism to mitigate the infection. Therefore, the aim of this work was evaluate rotavirus (ECwt) infection on in vitro model system consisting of intestinal villi isolated from ICR adult mice, infected with ECwt and treated with specific NF-kB inhibitors such as curcumin, Diethyldithiocarbamate and diethyl maleate, analyzing the variation in NF-kB expression and rotavirus infection by ELISA, immunofluorescence and Western Blotting techniques. We found that NF-kB protein expression measured in mean fluorescence intensity and viral antigens to increase with infection, but when intestinal villi isolated - infected with rotavirus were treated with inhibitors, the protein expression decreases as did the percentages of viral antigen absorbance. The isolated villi of mouse ICR when inoculated in vitro with the ECwt rotavirus, increase the expression of NF-kB protein and related proteins in pro-inflammatory pathways, such as PPARγ and COX-2 in addition increase to ROS levels. In addition, the use of NF-kB inhibitors such as curcumin, diethyl-carbamate and diethyl-maleate decrease the expression of these proteins, as well as ROS levels and reduce viral antigen production. On the other hand, the use of NF-kB inhibitors such as curcumin, diethyl carbamate and diethyl maleate decrease the expression of these proteins, as well as ROS levels and reduce the production of viral antigens.