Producción e inmovilización de la enzima dextransacarasa (DS) producida por Leuconostoc mesenteroides para la biosíntesis de dextrano.

Abstract

The Biopolymers and Biofunctionals group of the Biotechnology Institute has worked to optimize the conditions for the production of the enzyme dextransucrase used for the production of dextran. Dextran is a polysaccharide formed by D-glucose molecules, linked primarily by α- (1 → 6) bonds and in the branched chain by α- (1 → 2), α- (1 → 3), α- (1 → 4). The objective of this work was to evaluate the production and immobilization of the enzyme dextransucrase (DS), produced by a native Colombian strain of Leuconstoc mesenteroides IBUN 91.2.98 by fermentation using a 6% sucrose medium, with a concentration of 0.1 M phosphates, pH 7.2 not controlled, temperature of 30 ° C, stirring 150 r.p.m and a fermentation time of 4 hours. The enzymatic activity was evaluated by determination of reducing sugars by the DNS (3,5 Dinitrosalicylic acid) method and glucose by the glucose oxidase method, obtaining a hydrolytic activity of 4.8 to 7.3 U / ml and the transfer of 4.3 to 7 U / ml. The approximate molecular weight of the enzyme was determined by protein electrophoresis (SDS-PAGE) from 178 to 180 kDa. The DS was immobilized by two methods: adsorption in Sephadex G-100 and covalent binding to Eupergit CM, obtaining a low hydrolytic activity of 0.051 U / ml for Sephadex G-100 and 0.052 U / ml for Eupergit CM. Transfer activity could not be determined.

El grupo de Biopolímeros y Biofuncionales del Instituto de Biotecnología ha trabajado en optimizar las condiciones para la producción de la enzima dextransacarasa empleada para la producción del dextrano. El objetivo de este trabajo consistió en evaluar la producción e inmovilización de la enzima dextransacarasa (DS), producida por una cepa nativa colombiana de Leuconostoc mesenteroides IBUN 91.2.98 por fermentación empleando un medio modificado de sacarosa al 6%, con una concentración de fosfatos 0,1 M, pH 7,2 no controlado, temperatura de 30°C, agitación 150 r.p.m y a un tiempo de fermentación de 4 horas. La actividad enzimática se evaluó mediante la determinación de azúcares reductores por el método DNS (ácido 3,5 Dinitrosalicílico) y glucosa por el método de glucosa oxidasa, obteniéndose una actividad hidrolítica de 4,8 a 7,3 U/ml y de transferencia de 4,3 a 7 U/ml. El peso molecular aproximado de la enzima determinada por electroforesis de proteínas (SDS-PAGE) fue aproximadamente de 178 a 180 kDa. La DS se inmovilizó mediante dos métodos: adsorción en Sephadex G-100 y unión covalente a Eupergit CM, obteniendo una actividad hidrolítica baja de 0,051 U/ml para Sephadex G-100 y 0,052 U/ml para el Eupergit CM. La actividad de transferencia no se pudo determinar.