The present investigation evaluated the effect in the motility and spermatic rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) fertility of a saline solution 0.98% NaCl enriched with 2.5; 5.0; 10.0 and 20.0mM of caffeine, using as control saline solution without caffeine. The use of caffeine at a concentration of 10mM in the activator solution duplicated the time of spermatic motility (160.0 ± 18,8s) in contrast with the control (80,0 ± 12,5s). Increased fertility was observed when caffeine was used in the activator, although the values were not statistically different in relation with the control (81.6 ± 5.7%). These results demonstrate the capacity of caffeine to enhance spermatic motility in rainbow trout. Further research must be conducted to elucidate the minimum concentrations of caffeine required in intensive production systems.En la presente investigación se evaluó el efecto en la motilidad y fertilidad espermática de trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss) de una solución salina 0,98% de NaCl enriquecida con 2,5; 5,0; 10,0 y 20,0mM de cafeína, utilizando como control una solución salina sin cafeína. Al utilizar cafeína en concentraciones de 10mM en la solución activadora se duplicó la duración de la motilidad espermática (165,0 ± 18,8s) con respecto al control (80,0 ± 12,5s). Se registró un aumento de la fertilidad al utilizar cafeína en el activador, aunque los valores no fueron estadísticamente significativos con respecto al control (81,6 ± 5,7%). Estos antecedentes demuestran la capacidad de la cafeína de prolongar la motilidad espermática en trucha arcoiris, aún cuando se debe continuar con nuevos ensayos que permitan determinar las dosis mínimas de cafeína requeridas para ser utilizadas en sistemas de producción masivos.