Actividad antibacteriana y citotóxica de bioconjugados de péptidos Ib-M con nanopartículas de óxido de hierro contra Escherichia coli O157:H7 y células vero

Abstract

Escherichia coli O157:H7 es el patógeno más común aislado en brotes relacionados con alimentos cárnicos, está directamente asociado con el desarrollo del Síndrome Hemolítico Urémico (SHU) y posee gran capacidad para desarrollar resistencia antimicrobiana. Péptidos Ib-M son análogos de Ib-AMP4 (Derivados de Impatiens balsamina) y han mostrado actividad contra E. coli no patógena. Los péptidos suelen ser susceptibles a ser degradados rápidamente en entornos fisiológicos; el uso de nanopartículas de óxido de hierro recubiertas con quitosano (NpOH@Qui) como moléculas transportadoras los protege del efecto de las proteasas y sus propiedades magnéticas los dirige con mayor especificidad a los órganos blanco. En este estudio se evaluó la actividad contra E. coli O157:H7 y su citotoxicidad en células VERO de péptidos Ib-M y del bioconjugado de péptido Ib-M con nanopartículas de óxido de hierro recubiertas con quitosano (IbM/NpOH@Qui). Para ello, la actividad antibacteriana de los péptidos Ib-M y de IbM/NpOH@Qui se obtuvo al determinar la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI), Concentración Mínima Bactericida (CMB), Cinética de Crecimiento y Letalidad. El efecto citotóxico de los compuestos se evaluó por MTT y posteriormente se calculó la Concentración Citotóxica 50 (CC50) e índices de selectividad (IS). La CMI de péptidos Ib-M se obtuvo en un rango de 1,6 a 12,5 μM y la CMB de 3,7 a 22,9μM. Células VERO en presencia de péptidos Ib-M mostraron CC50 en un rango de 197,5 a >400 μM. Ib-M1 fue el péptido seleccionado para ser inmovilizado en la NpOH@Qui. El bioconjugado IbM/NpOH@Qui obtuvo una CMI de 12,5 μM contra E. coli O157:H7 y en células VERO una CC50 >25 μM (357 μg/Ml NpOH@Qui). Los péptidos libres y el bioconjugado presentaron actividad in vitro contra E. coli O157:H7. El Bioconjugado se considera un nanotransportador promisorio que una vez sea perfeccionado podría ser llevado a ensayos de experimentación in vivo.

Escherichia coli O157:H7 is the most common pathogen isolated in outbreaks related to meat foods, is directly associated with the development of Hemolytic Uremic Syndrome and has great capacity to develop resistance to antibiotics. Ib-M peptides are analogs of Ib-AMP4 (Derived from Impatiens balsamina) and have shown activity against nonpathogenic E. coli. Peptides are usually susceptible to rapid degradation in physiological environments; the use of iron oxide nanoparticles coated with chitosan (NpOH@Qui) as carrier molecules protects them from the effect of proteases and their magnetic properties direct them with greater specificity to target organs. In this study the activity against E. coli O157: H7 and its cytotoxicity in VERO cells of Ib-M peptides and peptide bioconjugate Ib-M with iron oxide nanoparticles coated with chitosan (IbM/NpOH@Qui) will be evaluated. The antibacterial activity of Ib-M peptides and IbM/NpOH@Qui was obtained by determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC), Minimum Bactericidal Concentration (MBC), Growth and Lethality Kinetics. The cytotoxic effect of the compounds was evaluated by MTT and then Cytotoxic Concentration 50 (CC50) and selectivity indexes were calculated. The MIC of peptides Ib-M was obtained in a range of 1.6 to 12.5 μM and the MBC of 3.7 to 22.9 μM. VERO cells in the presence of Ib-M peptides showed CC50 in a range of 197.5 to >400 μM. Ib-M1 was the peptide selected to be immobilized on the NpOH@Qui. The bioconjugate IbM1/NpOH@Qui obtained a CMI of 12.5 μM against E. coli O157: H7 and in VERO cells a CC50 >25 μM (357 μg/mL NpOH@Qui). The free peptides and the bioconjugate showed in vitro activity against E. coli O157:H7. The Bioconjugate is considered a promising nanotransporter that once perfected could be taken to in vivo experimentation trials.