A produção brasileira de leite de búfala e de seus derivados vêm crescendo anualmente devido às suas características peculiares. O gênero Staphylococcus destaca-se por ser causador da mastite contagiosa e de difícil tratamento devido à resistência aos antimicrobianos. Neste estudo foram colhidas 160 amostras de leite de búfala de uma propriedade localizada no município de Analândia, Estado de São Paulo. Nenhuma búfala apresentou sinais clínicos de mastite, 32 quartos mamários apresentaram mastite subclínica com reação positiva ao CMT. Foram isoladas 22 estirpes de Staphylococcus aureus (13,7%). As estirpes demonstraram sensibilidade à cloranfenicol (100%), rifampicina (100%), cefepime(100%), oxacilina(100%), ciprofloxacina, gentamicina(100%), tetraciclina (100%) clindamicina (96,9%), vancomicina (96,9%), (96,9%), cotrimoxazol (93,8%) e, entretanto demonstraram resistência à penicilina (31,3%) e eritromicina (43,8%) e uma estirpe apresentou-se multirresistente. Estes resultados reforçam que assim como nos bovinos, os bubalinos necessitam de um rígido programa de controle sanitário, principalmente da mastite.