Artículo de revista
Caracterización de un modelo organotípico de cultivos de neuronas corticales de humano derivadas de trauma craneoencefálico.
Autor
Riascos, David
Guzmán, Francisco
Buriticá, Efraín
Palacios, Mauricio
Escobar, Martha Isabel
Pimienta, Hernán
Institución
Resumen
Introducción: El trauma craneoencefálico (TEC) es un problema de salud global que puede generar en los pacientes que
lo padecen, muerte, discapacidad y/o alteraciones psiquiátricas con gran impacto sobre su desempeño posterior y sobre su
ámbito familiar. En los últimos años se ha avanzado en el conocimiento de los mecanismos fisiopatológicos que subyacen
al TCE. Sin embargo, esto no está completamente entendido, como tampoco hay claridad sobre los mecanismos de
neuroprotección. Por esta razón cada vez más se buscan modelos que permitan aproximarse al estudio de este síndrome y de
esta manera aproximarse a la neuroprotección.
Objetivo: Caracterizar un modelo de cultivo organotípico de neuronas corticales humanas obtenidas de personas que
sufrieron TCE y a las cuales se les practicó remoción de la contusión.
Metodología: Se utilizó tejido cortical humano procedente de 4 individuos que sufrieron TCE y a los cuales se les removió
la contusión. Se obtuvieron tajadas de corteza cerebral de 1,500-2,000 μm, las cuales se mantuvieron en un flujo continuo de
LCRa a 2 ml/min y una mezcla gaseosa de O2 al 95% y CO2 al 5% con burbujeo permanente durante 2, 8 y 14 horas. Se tomó
como tiempo cero el momento de obtención de la muestra. Después de cada tiempo se tomaron las tajadas, se cortaron en un
vibrátomo de medio líquido a 50 μm y se procesaron inmunohistoquímicamente con los marcadores neuronales de
degeneración NeuN y MAP2.
Resultados: Los resultados indican que las muestras de corteza cerebral se pudieron mantener con cierto grado de
integridad celular y laminar hasta las 2 horas de cultivo. Se observó que a partir de este tiempo se inicia un proceso de alteración
de la citoarquitectura neuronal y laminar, determinada por la pérdida y alteración de la inmunorreactividad a los marcadores
NeuN y MAP2. Además se encontró que hay vulnerabilidad celular que compromete en mayor medida a las neuronas
localizadas en las láminas corticales III y V.
Conclusiones: Se pudo caracterizar el modelo organotípico de cultivo de neuronas corticales humanas que determinó
integridad neuronal y organización laminar clara hasta las 2 horas de evolución, lo cual permitiría la utilización de fármacos
neuroprotectores durante este período. Se encontró vulnerabilidad laminar preferencialmente para las capas corticales III y
V. El modelo dejó establecer la evolución temporal de las neuronas de la zona contusa. Introduction: Traumatic brain injury is a global medical problem whose survivors may show disability and neurological
or psychiatric sequelae. In the last few years the knowledge of physiopathological mechanisms of TBI has increase but still
it is not entirely known. For this reason the research has turn over in one´s mind in new strategies to study this pathology looking for neuroprotection.
Objective: The aim of this work is to develop an organotypic
culture of cortical human neurons derived from a contusion
tissue obtain from patients that suffered TBI.
Methodology: We used contused brain tissue from 4 TBI
patients. Sections between 1,500-2,000 μm were kept in a
continuous flow of aCSF 2 ml/min in a mixture of 95% O2 and
5% CO2 for 2, 8 and 14 hours. The initial time (0 hours) was the
tissue extraction time. From blocks, sections of 50 μm were
obtained and processed for immunocytochemistry to NeuN
and MAP 2.
Results: The results show that organotypic cultures keep
neuron integrity and laminar organization in the cerebral
cortex slices from 0 to 2 hours. From this time ahead neuronal
morphology and laminar organization is altered especially in
neurons located on layers III and V.
Conclusions: Organotypic culture could be maintained
from 0-2 hours. Neuronal and laminar integrity could be
demonstrated. The model lead to study neuronal behaviour
after TBI through different survival times. Laminar selective
vulnerability was demonstrated for layers III and V.