Interações cruzadas entre os receptores de cininas e da angiotensina II e enzima conversora da angiotensina I em músculo liso vascular e não vascular pelo rompimento seletivo dos genes que codificam os receptores de cininas

Abstract

Purpose: Our aim was to evaluate possible crossed interactions between kallikrein-kinin and renin-angiotensin systems in abdominal aorta and fundus stomach isolated from mice deficient in kinin B1, B2 or both sub-types B1 and B2 receptors. Methods: determination of pharmacological parameters through mechanical recordings of contractile effects of aorta and stomach isolated from, normal WT and mice deficient in B1 receptor (B1KO), B2 receptor (B2KO) and both kinin receptors B1 and B2 receptors (B1B2KO); isolation of total RNA and determiantion of mRNA expression level of genes for kinin and angiotensin II (AngII) receptors, in addition to expression level of angiotensin converting enzyme (ACE), using real time PCR method. Results: The maximal effect (Emax) of responses induced by bradykinin (BK) and desArg9BK (DBK) was lower in abdominal aorta from transgenic B1KO and B2KO than in WT mice, whereas the potency was inaltered. The ACE inhibitor, lisinopril was shown to potenciate the contractions induced by BK and to inhibit angiotensin I (AngI) induced contractions. The expression level of B1 (B1R) and B2 (B2R) receptors as well as the AngII AT1 (AT1R) and AT2 (AT2R) receptors were markedly reduced in these animals. However AT2R expression was increased in B1KO. The Emax induced by AngI was significantly reduced in aorta isolated from all transgenic mice. The expression of ACE was reduced in B1KO and B1B2KO but not in B2KO, which was higher than in WT animal. Concerning results obtained from gastric fundus of B1KO and B2KO, it was verified that the expression of their kinin receptors was markedly reduced. The expression of AT1R was drastically reduced in B1B2KO, whereas the AT2R expression was only reduced in B1KO. It was found that lisinopril could not potenciate BK induced responses although inhibited AngI-induced contractions. The expression level of ACE was reduced in B1KO but not in other transgenic mice. Conclusions: Our results provided evidence that interactions between kinin and AngII receptors occur and that the lack of kinin receptors affects the function and receptor expression, including the activity and expression of ACE. It is suggested that the observed alterations in these transgenic animals are due to cellular compensatory mechanisms that seem to be specific to each target tissue.

Objetivos: Investigar se ocorrem interações cruzadas entre os sistemas calicreínacininas e renina-angiotensina e possíveis efeitos compensatórios na aorta abdominal e fundus de estômago isolados de camundongos com deleção genética de receptores de cininas. Métodos: determinação de parâmetros farmacológicos através de registros de contração da aorta abdominal e fundus do estômago de camundongos selvagem ou com deleção genética do receptor B1 (B1KO), ou do receptor B2 (B2KO) ou dos dois receptores de cininas (B1B2KO); isolamento de RNA total e determinação da expressão do mRNA dos genes dos receptores de cininas e da angiotensina II (AngII) além da enzima conversora da angiotensina I (ECA) através da técnica de PCR em tempo real. Resultados: o efeito máximo induzido pela BK e pela DBK em aorta de animais deficientes em receptores B1 (B1R) e em receptores B2 (B2R) foi significativamente diminuído sem alteração da potência e o inibidor da ECA, lisinopril, potencializou as respostas à BK. O nível de expressão dos B1R e B2R de cininas e do receptor tipo I (AT1R) e tipo II (AT2R) da AngII foi reduzido em aorta abdominal de camundongos transgênicos, com exceção do nível de expressão do AT2R em camundongos B1KO que foi aumentado. O efeito máximo induzido pela angiotensina I (AngI) em aorta abdominal de camundongos transgênicos foi significativamente menor em relação ao animal selvagem e o lisinopril inibiu as respostas contráteis induzidas pelo peptídeo. O nível de expressão da ECA foi reduzido em camundongos B1KO e B1B2KO, enquanto em camundongos B2KO a enzima foi super-expressa. Em relação aos estudos envolvendo o fundus de estômago de camundongos B1KO e B2KO, verificou-se que a expressão dos receptores B1 e B2 foi diminuída em camundongos B2KO e B1KO respectivamente. A expressão do AT1R foi drasticamente reduzida em camundongos B1B2KO e a expressão do AT2R reduzida somente em camundongos B1KO. O lisinopril não foi capaz de potencializar a resposta à BK em camundongos B1KO, embora tenha inibido as respostas à AngI e o nível de expressão da ECA foi reduzido somente em camundongos B1KO. Conclusões: Nossos resultados obtiveram fortes evidências que ocorrem interações cruzadas entre os receptores de cininas, e da AngII, tanto farmacologicamente como no controle da expressão de seus receptores. Foi também comprovado o envolvimento de receptores de cininas na regulação da atividade e expressão da ECA. Conclui-se que a falta de receptores de cininas leva às alterações que provavelmente decorrem de mecanismos celulares compensatórios que parecem ser específicos em cada tecido.