Dissertation
Produção de camundongos transgênicos para o estudo de terapias celulares
Fecha
2009Registro en:
SILVA, C. A. Produção de camundongos transgênicos para o estudo de terapias celulares. 2009. 103 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa) - Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz, Salvador, 2009.
Autor
Silva, Cristina Aragão
Institución
Resumen
A transferência de genes mediada por vírus, em especial pelos vetores
lentivirais, é atualmente reconhecida como um eficiente sistema de transmissão
de genes, resultando em altas taxas de animais fundadores carreando o
transgene. Menos invasiva para os embriões, mais custo-efetivo e tecnicamente
menos exigente, optamos por essa metodologia para gerar camundongos
transgênicos expressando a proteína fluorescente verde em diferentes órgãos e
tecidos, para subsequente uso em terapia celular. Sob controle de três
promotores diferentes, ubiquitina-C, que controla a expressão da proteína nos
embriões e em todos os tecidos do camundongo adulto, da alfa-miosina
cardíaca, que direciona a expressão no coração, e da FmTie, que controla a
expressão apenas em células endoteliais de vasos, os zigotos foram
microinjetados no espaço subzonal e transferidos para fêmeas pseudogestantes.
Dos 31 animais nascidos, 22 animais (72%) apresentam o transgene integrado
em seu genoma. Entretanto, nenhum deles expressou a proteína fluorescente
verde. Como a inserção no genoma é aleatória, o efeito de posição
frequentemente observado pode afetar a expressão do transgene e de genes
endógenos, além de interromper estes últimos – mutagênese insercional –
levando ao chamado silenciamento gênico. Desta forma, estudos subsequentes
devem ser efetuados a fim de solucionar essa ausência de expressão dos
transgenes inseridos no genoma dos camundongos fundadores, viabilizando,
consequentemente, todo o processo de desenvolvimento de camundongos
transgênicos.