Maduración in vitro de ovocitos de perra provenientes de folículos poliovocíticos

Abstract

La perra presenta un alto porcentaje de folículos poliovocíticos (FPOs) con respecto a otras especies; sin embargo, se desconoce la capacidad de maduración de los ovocitos provenientes de estos folículos. Este estudio evaluó la maduración de ovocitos provenientes de FPOs in vitro, de acuerdo al estado de desarrollo folicular y de la etapa del ciclo estral de la perra. Se utilizaron ovarios de 64 perras adultas, identificando la etapa del ciclo estral en: anestro, proestro-estro y diestro. Se clasificaron, bajo lupa estereoscópica, distintos estados de desarrollo folicular en: pre-antrales (<300 µm), antrales pequeños (300-490 µm), antrales medianos (500-790 µm) y antrales grandes (>800 µm), separándolos en folículos mono y poli- ovocíticos. Los ovocitos de cada tipo folicular se extrajeron y se incubaron por 72h en TCM-199 suplementado bajo condiciones de cultivo. Posterior al cultivo se evaluó el desarrollo nuclear de los ovocitos previa fijación y tinción nuclear DAPI mediante microscopía de epifluorescencia. El desarrollo meiótico se clasificó en vesícula germinativa (VG), reinicio meiótico (GVBD) y metafase I y II (MI-MII). Los resultados analizados por ANOVA, indicaron que, aunque los ovocitos de FPOs presentaron en general mayor porcentaje de VG en comparación a los de folículos monovocíticos (P <0,05), no hubo diferencias en los porcentajes de MI-MII alcanzados entre los ovocitos provenientes de ambos tipos foliculares a través del desarrollo folicular y etapas del ciclo estral. Esto sugiere que los FPOs son una característica normal de la perra que no afectaría especialmente la maduración in vitro de los ovocitos.

The female dog presents a high percent of multioocyte follicles (MOFs) compared to other species; however, the maturation capacity of the oocytes from these follicles is unknown. The present study evaluated the in vitro maturation (IVM) of bitch oocytes from MOFs according to follicular development and phases of the estrous cycle. Canine oocytes obtained from 64 adult bitches at different phases of the estrous cycle r.g. anestrus, proestrus/estrus and diestrus were classified under stereomicroscope, according to stages of follicular development: pre-antral (<300 µm), small antral (300-490 µm), medium antral (500-790 µm) and preovulatory (>800 µm) and type of follicles: MOFs and unioocytes follicles (UOFs). The oocytes from each type of follicles were incubated for 72 h in TCM-199 medium supplemented under culture conditions. After fixation and DAPI staining, oocytes meiotic development was evaluated by epifluorescence microscopy. Meiotic developmental was classified into germinal vesicle (GV), germinal vesicle break down (GVBD) and metaphase I/II (MI/MII). The result analyzed by ANOVA indicated that although oocytes from MOFs showed mainly higher percentage of VG compared to those UOFs (P<0,05) there was no difference in the MI/MII rates between MOFs and UOFs follicles throughout development and estrus cycle. This suggests that MOFs might be a normal feature in bitches that this might not affect the in vitro oocytes maturation.