Se evaluó la presencia de enzimas inactivantes de aminoglucósidos en cepas clínicas y ambientales de Acinetobacter sp., de origen nosocomial, para la cual se utilizaron 43 cepas de Acinetobacter, 20 correspondientes a la genoespecie de A. baumannii y 23 cepas de Acinetobacter RUH 1139, dichas cepas fueron obtenidas de pacientes hospitalizados en la Unidad de Cuidados Intensivos de Adultos (UCI-A) y de la Unidad de Alto Riesgo Neonatal (UARN) del Instituto Autónomo Hospital Universitario de Los Andes (IAHULA), durante enero de 1998-abril de 1999, previamente identificadas bioquímica y molecularmente. Para la determinación de la susceptibilidad antimicrobiana se probaron seis aminoglucósidos (amikacina, gentamicina, tobramicina, netilmicina, dibekacina y neomicina), mediante la prueba de difusión en agar. Todas las cepas de A. baumannii fueron resistentes a la gentamicina, netilmicina, dibekacina y estreptomicina. En el caso de las cepas identificadas como Acinetobacter RUH 1139, más del 90% de las cepas mostraron resistencia ante amikacina, gentamicina y tobramicina, y el 82,61% fue resistente netilmicina y dibekacina, respectivamente. Se detectó el gen que codifica para la enzima 3’-O-aminoglucósido-fosfotransferasa-VIa (aph(3`)-VIa) en 3 cepas de A. baumannii aisladas de la UCI-A, mientras que, para Acinetobacter RUH 1139 se detectó en 17 cepas aisladas de la UARN.