Tesis
FENOTIPOS RELACIONADOS CON EL SISTEMA DE QUORUM SENSING NprR-‐NprRB EN Bacillus thuringiensis
Autor
ERNESTO GALLARDO ESPINOZA
Institución
Resumen
"NprR es una proteína de la familia de receptores de quórum sensing RNPP, funciona como un regulador transcripcional y es activado por su péptido de señalización NprRB. El regulón de NprR-NprRB incluye genes involucrados en la resistencia a condiciones de estrés y antibióticos, genes que codifican para el sistema oligopéptido permeasa (Opp) y genes que codifican para enzimas
degradativas, y hay además evidencias que indican que NprR participa en la esporulación. En este estudio evaluamos algunos fenotipos que podrían ser afectados en una mutante BtΔnprR-nprB. Posteriormente se expresaron los genes nprR-nprRB y variantes de este sistema de quórum sensing en dicha mutante para tratar de restablecer los fenotipos alterados. Así mismo se evaluó la adición de péptidos sintéticos en la mutante transformada sólo con el gen silvestre nprR o con un gen al que se le deletó la secuencia del dominio de unión a DNA (nprRΔHTH), en la complementación de la mutante. Los fenotipos de esporulación, actividad de proteasa neutra, “swarming”, formación de biopelícula y expresión de la proteína CryIAa se vieron afectados por la mutación. Los fenotipos de proteasa neutra y esporulación fueron complementados mediante la expresión de los genes nprR-nprRB a partir del
plásmido pMAD con la construcción nprR-nprRB. La expresión del gen nprRΔHTH junto con nprRB restableció el fenotipo silvestre de esporulación, evidenciando una función de NprR independiente de su función como regulador transcripcional. Así mismo, los resultados de expresión de Cry1Aa, muestran que NprR probablemente es un represor de Cry1Aa, al observarse en la cepa
mutante una mayor expresión de Cry1Aa en comparación con la cepa silvestre. La restauración del fenotipo de actividad de proteasa neutra con los péptidos sintéticos SKPDIVG y SSKPDIVG en la cepa ΔnprRnprRB[pNprR], indica que ambos péptidos son activos y sugiere que más de un único péptido de señalización codificado en nprRB es funcional.
Palabras Clave: Quorum Sensing, NprR, Bacillus thuringiensis, Esporulación"