En respuesta a la hipoxia ambiental (baja concentración de oxígeno disuelto en agua) cambia el metabolismo energético del camarón blanco Litopenaeus vannamei, activándose la glucólisis anaeróbica. Una de las principales enzimas involucradas en este proceso es la lactato deshidrogenasa (LDH), que cataliza la producción de lactato a partir de piruvato. Se han identificado dos subunidades proteicas de la LDH de L. vannamei (LDH-1 y LDH-2), deducidas de diferentes transcritos que provienen de un mismo gen por medio del procesamiento por corte y empalme alternativo mutuamente excluyente, pero no se ha purificado la enzima activa o sus subunidades proteicas y menos aún se ha realizado la caracterización bioquímica y cinética. Por lo anterior, el objetivo de este trabajo fue sobreexpresar y purificar la subunidad LDH-2 recombinante de camarón blanco L. vannamei para su posterior caracterización bioquímica y cinética. El cDNA de la LDH-2 fue previamente clonado en el vector pTXB1 para producir una proteína de fusión con una región de inteína y un dominio de unión a quitina. La sobreexpresión se realizó en Escherichia coli ER2566 y se purificó por cromatografía de afinidad a una matriz de quitina. La asociación de las subunidades de LDH-2 recombinante pura generó una proteína activa llamada LDH-2. La actividad enzimática se determinó espectrofotométricamente midiendo la disminución de la absorbancia a 340 nm por la oxidación del NADH durante la reducción del piruvato. Las características bioquímicas y cinéticas se determinaron monitoreando la actividad enzimática a pH y temperaturas variables, así como variando las concentraciones de NADH, piruvato y otros sustratos. La LDH-2 recombinante de L. vannamei tiene un pH óptimo de 7.5, es estable al pH entre 7.0 y 8.5, tiene una temperatura óptima de 50 °C, y es estable entre 20 y 50 °C. Se determinaron dos valores de pKa de 9.3 y 6.9 y la energía de activación es de 44.8 kJ/mol*K. Con base a los patrones de velocidad inicial se calcularon la Km NADH =0.57 ± 0.01 mM y una Km piruvato = 5.4 ± 0.3 mM y Vmax de 7.4 μmoles/min/mg de proteína. La proteína nativa tiene una masa molecular de aproximadamente 140 kDa y, por último, se encontró mayor afinidad al piruvato respecto al lactato. Se concluye que la enzima LDH-2 recombinante de L. vannamei posee características bioquímicas similares a la LDH nativa de otros crustáceos, pero tiene diferencias cinéticas. Palabras claves: Lactato deshidrogenasa, caracterización bioquímica,