A criptococose é uma micose sistêmica com caráter oportunista, que pode acometer homens e diferentes espécies animais, principalmente em casos de imunodepressão. A infecção pode ser adquirida através da inalação, e por via hematógena, tem a capacidade de atingir e colonizar o sistema nervoso central. Objetivando o isolamento da levedura Cryptococcus neoformans a partir de sistema nervoso central de cães e gatos, no Município do Rio de Janeiro, procederam-se coletas no Laboratório de Diagnóstico de Raiva do Instituto Municipal de Medicina Veterinária Jorge Vaitsman, Rio de Janeiro. A etapa de isolamento e identificação se deu no Laboratório de Leveduras Patogênicas e Ambientais da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (LLPA-UFRRJ). Obteve-se um total de duzentas e uma amostras, sendo 166 de cães e 35 de gatos, resultando em quatro isolamentos positivos para o gênero nas amostras provenientes de cães; sendo um de Cryptococcus laurentii, dois de Cryptococcus neoformans e um de Cryptococcus gattii. Com este trabalho, obteve-se o primeiro isolamento descrito de Cryptococcus laurentii de sistema nervoso central de cão.