dc.description.abstract | La regulación de la transcripción por secuencias promotoras que interaccionan COfl
receptores nucleares, involucra el reclutamiento de coactivadores que permiten: 1) modificar la
estructura de la cromatina por medio de su actividad acetilasa de histonas (HAT). (Ej: complejo
p160/p300/pCAF) y 2) la conexión con la maquinaria transcripcional basa¡. (Ej: complejo
DRIP). Ambos tipos de coactivadores se unen en forma ligando dependiente a los receptores
nucleares.
En esta tesis demostramos la participación y el mecanismo molecular que regula la unión
de coactivadores al receptor de vitamina D3 (VDR), demostrando la interacción de los
complejos p160 y DRIP dentro del contexto celular y evaluando los ciclos de unión de estos
complejos coactivadores al promotor de osteocalcina de rata (OC), en respuesta a vitamina D3.
Encontramos que la sobreexpresión de los coactivadores SRC-1 y Drip205 aumenta la actividad
del promotor OC bajo estimulación con la,25-dihidroxivitamina D3. Este efecto potenciador
fue también confirmado mediante la utilización de dominantes negativos para SRC-1 y Drip205
respectivamente, los cuales inhibieron la actividad del promotor OC frente a la estimulación por
el ligando. Además, por co-inmunoprecipitación de proteínas, demostramos que VDR. SRC-1,
p300 y Runx2 son componentes de un mismo complejo nuclear. También estudiamos la unión
de estos complejos coactivadores, en condiciones basales y de estimulación por vitamina D3, al
promotor de OC de rata, mediante la técnica de inmunoprecipitación de cromatina acoplado a
PCR en tiempo real. Observamos que el coactivador SRC-1 se asocia al promotor de OC
durante las primeras cuatro horas de estimulación con la,25-dihidroxjvjtamjna D3, a diferencia
de Drip205 que interactúa con el promotor OC sólo después de ocho horas de incubación con el ligando. Podemos concluir entonces que, ambos coactivadores interactúan con el receptor de
vitamina Di, en forma secuencial, excluyente y no cíclica. Conjuntamente, investigamos la
expresión del gen OC bajo el tratamiento con la,25-dihidroxivitamina D3 y encontramos que
existe una estabilización del rnRNA de osteocalcina dado por el tratamiento con vitamina D3.
Observamos además, un aumento de la acetilación de la histona H4 tras la estimulación con
vitamina D3, lo que se correlaciona con la unión del coactivador SRC-1 al promotor de OC. Por
otro lado, la sobreexpresión de una mutante de SRC-1, que presenta una deleción entre los
aminoácidos 1107 y 1441 (A1107-1441) y que no presenta actividad HAT, no aumentó la
actividad transcripcional del promotor OC. En su conjunto nuestros resultados indican, que dos
clases de coactivadores SRC-1 y Drip205, estarían participando en el aumento de la actividad
transcripcional del gen de OC mediado por la,25—dihidroxivitamina D3, y que ambos
coactivadores interaccionan con el receptor de vitamina D3, pero en fbrma secuencia],
excluyente y no cíclica. | |