Los polihidroxialcanoatos (PHA) son biopolímeros termoestables sintetizados por algunas bacterias, que los acumulan como reserva de carbono. Estos compuestos representan una opción para la sustitución de polímeros sintéticos no biodegradables. En este trabajo se determinó el efecto que ejerce la temperatura de fermentación y la concentración de azúcares reductores en la producción de un biopolímero, utilizando la bacteria Bacillus subtilis. Para esto, se realizó un diseño experimental con dos variables independientes: concentración de azúcares reductores (10 g/L, 20 g/L y 30 g/L) y temperatura de fermentación (33°C, 35°C y 37°C). En la hidrólisis del bagazo de caña de azúcar se usó el método de la hidrólisis ácida diluida, agregando el inóculo de Bacillus subtilis y solución mineral para posteriormente llevarlos a fermentación aeróbica. La biomasa se determinó mediante el peso seco celular y el contenido de biopolímero, por espectrofotometría ultravioleta visible (UV- VIS) y espectrofotometría infrarrojo de transformada de Fourier (ATR- FT- IR). Los resultados muestran que a una concentración inicial de 30 g/L (gramos de azúcares reductores por litro de hidrolizado) y con la temperatura de fermentación de 37°C, la productividad máxima obtenida de biomasa respecto a sustrato (Yx/s) fue de 0,014 g/g (gramos de biomasa producida por gramos de sustrato consumido); es decir 1,4% de rendimiento. Sin embargo, a las condiciones evaluadas, a una temperatura de fermentación de 35°C y con una concentración inicial de 20 g/L (gramos de azúcares reductores por litro de hidrolizado), se logró una productividad máxima de XV biopolímero respecto a biomasa (Yp/x) igual a 0,34 g/g (gramos de biopolímero producido por gramos de biomasa producida); es decir 34,0% de rendimiento