Endofíticos são micro-organismos que colonizam o interior das plantas sem aparentemente causar danos ao seu hospedeiro, sendo encontrados em órgãos e tecidos vegetais como folhas, ramos e raízes. Em geral produzem metabólitos secundários de interesse farmacológicos, como também aplicáveis no controle biológico de pragas e doenças. O presente trabalho teve como objetivo investigar a atividade biológica e a caracterização química dos metabólitos secundários do Streptomyces sp. UFPEDA 3345 endofítico isolado de folhas de Momordica charantia L.. A fermentação em cultivo submerso desta linhagem apresentou como melhores condições para produção de metabólitos bioativos o meio M1 com 72 horas de cultivo em pH alcalino. Os extratos acetoetílico do líquido metabólico (EBLM) e o metanólico da biomassa (EBB) foram submetidos aos ensaios de citotoxicidade frente a células tumorais, à avaliação do potencial hemolítico em eritrócitos de camundongos, toxicidade aguda, determinação da concentração mínima inibitória (CMI) e à prospecção química. O extrato metanólico da biomassa (EBB) foi cromatografado em coluna de sílica gel e a fração F4 foi analisada através de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) resultando na obtenção de três subfrações C1, C2 e C3. Para a atividade citotóxica frente às linhagens HT-29 (carcinoma de cólon), HEp-2 (carcinoma de laringe), NCI-H292 (carcinoma de pulmão) e MCF-7 (carcinoma de mama) na dose única de 50 μg/mL, os extratos, frações e subfrações apresentaram percentual de inibição do crescimento celular entre 17 e 93%. Após a administração da dose de 2.000 mg/kg do extrato EBB em camundongos, não foram observados efeitos tóxicos, sinais visíveis de toxicidade sistêmica e morte dos animais. Quanto ao potencial hemolítico dos extratos, estes apresentaram concentração efetiva de CE50 > 500 μg/mL e não promoveram danos à membrana eritrocitária. As amostras apresentaram atividade antimicrobiana para bactérias Gram-positivas, Gram-negativas, bactéria álcool ácido resistente, fungo filamentoso, leveduras e fitopátogenos. O extrato EBLM apresentou valores de CMI menores para B. subtilis (15,62 μg/mL), M. luteus (7,8 μg/mL) e M. smegmatis (15,62 μg/mL) em comparação ao extrato EBB. A CMI para A. niger, C. albicans e C. krusei os valores variaram de 15,62 a 250 μg/mL. A fração F4 e a subfração C1 apresentaram valores de CMI iguais de 62,5 μg/mL para C. albicans, A. niger e M. smegmatis. Quanto aos valores de CMI dos extratos EBLM e EBB frente a fungos e bactérias fitopatogênicos variaram entre 15,62 a 500 μg/mL. A prospecção química demonstrou a presença de açúcares redutores, compostos fenólicos, mono/sesquiterpenos, triterpenos e esteróides. Os resultados evidenciam que a linhagem endofítica Streptomyces sp. UFPEDA 3345 produz diferentes biomoléculas com diversas atividades biológicas.CNPq