masterThesis
Estudos moleculares aplicados ao circovírus suíno tipo 2: desenvolvimento da técnica de Nested-PCR em tubo único (STNPCR) e descrição das variantes virais em Pernambuco
Registro en:
Autor
PONTES, Nayara Evaristo de
Institución
Resumen
O Circovírus suíno tipo 2 (PCV2) é um vírus sem envelope e contém um DNA fita
simples circular com 1,7 kb de tamanho. O vírus pertence ao gênero Circovírus da
família Circoviridae. O PCV2 é o agente etiológico da Síndrome Multissistêmica do
Definhamento dos Suínos (PMWS), doença que causa grande impacto econômico
na suinocultura mundial. O objetivo deste trabalho foi desenvolver a técnica de
STNPCR para detecção do Circovírus suíno tipo 2 (PCV2) bem como avaliar a
presença de diferentes variantes virais em Pernambuco. Foram utilizados controles
positivos, negativos, e 55 amostras de tecidos de animais clinicamente normais
obtidas em abatedouro. Para o desenvolvimento da STNPCR foram avaliadas
diferentes temperaturas de anelamento para os primers externos e internos. A
atuação de ambos os pares de primers foi realizada de forma independente, sendo
que o segundo par de primers foi imobilizado na parte interna da tampa do microtubo
e após a primeira etapa de amplificação os primers foram eluídos por inversão do
microtubo. Além disso, foi realizada a análise de achado técnico buscando encontrar
os genótipos do PCV2 já descritos no Brasil e mundialmente, os subtipos PCV2a e
PCV2b. Na aplicação clínica, a STNPCR foi comparada com a NPCR e resultaram
em reações positivas para o PCV2 em 100% (55/55) das amostras analisadas,
revelando igual sensibilidade e especificidade, porém, com menor risco de
contaminação cruzada. Na análise de achado técnico (sequências da ORF2 do
PCV2), foi possível identificar os genótipos PCV2a e PCV2b. A técnica molecular
STNPCR demonstrou ser eficaz para detecção do DNA viral e pode ser aplicada em
estudos epidemiológicos para o PCV2 e auxiliar no diagnóstico laboratorial da
PMWS. CNPq; CAPES