masterThesis
Avaliação da Atividade Antineoplásica In Vitro e In Vivo de Extratos Orgânicos de Pseudociphelaria aurata (Liquén)
Registro en:
LACERDA, Sâmia Dayana Lemos de. Avaliação da atividade antineoplásica in vitro e in vivo de extratos orgânicos de Pseudociphelaria aurata (Líquen). Vitória de Santo Antão, 2012. 59 f. Dissertação (mestrado) - UFPE, Centro Acadêmico de Vitória, Programa de Pós-graduação em Saúde Humana e Meio Ambiente, 2012..
Autor
LACERDA, Sâmia Dayana Lemos de
Institución
Resumen
Os metabólitos secundários liquenicos são amplamente descritos na literatura por suas propriedades biológicas, citando-se: antimicrobiana, antinflamatória, indutora de interferon, cicatrizante, antineoplásica e citotóxica, entre outras. O presente estudo descreve a avaliação da atividade antineoplásica in vitro e in vivo dos extratos orgânicos da Pseudociphellaria aurata. O material botânico foi coletado no município de Saloá - PE. Os extratos orgânicos foram obtidos através do método de esgotamento a quente em aparelho de soxlet, seguindo-se a série eluotrópica dos solventes, éter, clorofórmio e acetona. Os extratos foram então rotaevaporados e mantidos em dissecador até peso constante. Foram realizadas análises cromatográficas utilizando-se técnicas em camada delgada (CCD) e líquida de alta eficiência (CLAE). Em seguida, os extratos etéreo e clorofórmico foram utilizados em testes de citotoxicidade, utilizando-se as células HeLa (carcinoma epidermoide do colo uterino) e o método de MTT. Em seguida foram realizados ensaios de toxidez aguda e a determinação da DL50. Por fim, realizou-se a avaliação da atividade antitumoral, utilizando-se os tumores sólidos de Erhlich e Sarcoma 180. Os tecidos tumorais foram ainda submetidos à análise histopatológica utilizando-se a técnica de marcação das regiões organizadoras de nucléolos com prata coloidal (AgNOR). O processo de obtenção dos extratos mostrou-se bastante eficiente, sendo obtidos rendimentos de 3,75% de cristais na extração com éter. A análise cromatográfica em camada delgada demonstrou a presença de calicina, ácido pulvínico e sua lactona. Estes dados foram confirmados pelos estudos em CLAE que demonstraram a maior concentração do ácido pulvínico nos extratos etéreo, seguido pelo clorofórmico e sua ausência no extrato acetônico. Os testes de atividade citotóxica mostraram as concentrações inibitórias a 50% (IC50) de 3,75µg mL-1 e 17µg mL-1 para os extratos etéreo e clorofórmico, respectivamente, frente as células. Os ensaios de toxidez demonstraram que os extratos apresentaram ausência de toxidez, entretanto não foi possível se determinar a DL50, pois, até a concentração de 2000mg kg-1 não se verificou letalidade dos animais testados. O extrato etéreo apresentou relevante atividade antitumoral com uma redução do crescimento tumoral de 67% frente ao sarcoma 180 e de 56,4% frente ao carcinoma de Erhlich, em relação ao grupo xi controle. Os resultados dos ensaios com a técnica de AgNOR demonstraram que no caso do carcinoma de Erlich houve uma significativa inibição do ritmo mitótico e no Sarcoma 180 maior área de necrose tumoral. Em adição a isto, pode-se sugerir que o principal responsável pelas atividades observadas é o ácido pulvínico, encontrado em maior concentração no extrato mais ativo. O conjunto de dados obtidos foi bastante relevante uma vez que os extratos analisados apresentaram significativa atividade antineoplásica in vitro e in vivo e cujo mecanismo de ação parece estar relacionado com a inibição do processo mitótico e não somente a ação citotóxica propriamente dita. The secondary metabolites of lichens are widely described in the literature by its biological properties, citing: antimicrobial, anti-inflammatory, inducing interferon, healing, cytotoxic and anticancer, among others. The present study describes the in vitro and in vivo evaluation of antineoplastic activity of organic extracts from Pseudociphellaria aurata. The plant material was collected in the city of Saloá, State of Pernambuco, Brazil. The organic extracts were obtained by the method of heat exhaustion in soxlet apparatus, followed by solvents’ eluotropic series, ether, chloroform and acetone. The extracts were then rotavaporated and kept in a desiccator until constant weight. Chromatographic analyzes were performed using techniques thin layer (TLC) and high performance liquid (HPLC), in order to determine its phenolic composition. Then, ether and chloroform extracts were used in cytotoxicity assays using HeLa cells (epidermoid carcinoma of the cervix) the MTT method. Then tests and the determination of acute toxicity LD50 were performed. Finally the evaluation of antitumor activity was made, by the use of Erhlich of solid tumors and Sarcoma 180. The tumor tissues were also subjected to histopathological analysis using the technique of marking of nucleolar organizer regions with colloidal silver (AgNOR). The process of obtaining the extracts proved to be very efficient and it obtained yields of 3.75% of crystal extraction with ether. The thin layer chromatographic analysis demonstrated the presence of calycin, pulvinic acid and its lactone. These data were confirmed by HPLC studies which showed that the highest concentration of pulvinic acid in extracts ether, followed by chloroform and its absence in acetone extract. The tests of cytotoxic activity showed the IC50 of extracts and ethereal chloroform forward cells were respectively 3.75 mg mL-1 and 17 mg mL-1. The toxicity tests showed that extracts showed absence of toxicity, however it was not possible to determine the LD50 for until the concentration of 2000mg kg-1 was not observed lethality of animals tested. The ether extract showed significant antitumor activity and it was observed a reduction of tumor growth of 67% compared with sarcoma 180 and 56.4% against the Erhlich carcinoma, compared to the control group. The results of tests with AgNOR technique demonstrated that in the case of Ehrlich carcinoma was a significant inhibition of the mitotic rate and the xiii greater field Sarcoma 180 Tumor necrosis. In addition to this, it can be suggested that the principal responsible for the observed activities is the pulvinic acid, found in highest concentration in the most active extract. The data set was quite relevant since the analyzed extracts showed significant anticancer activity in vitro and in vivo and whose mechanism of action appears to be related to inhibition of the mitotic process and not only to the cytotoxic action itself.