masterThesis
Avaliação do uso de células da levedura Pichia pastoris para expressão do gene L1 do Papilomavírus Humano tipo 16
Registro en:
Campos Coimbra, Eliane; Carlos de Freitas, Antonio. Avaliação do uso de células da levedura Pichia pastoris para expressão do gene L1 do Papilomavírus Humano tipo 16. 2007. Dissertação (Mestrado). Programa de Pós-Graduação em Genética, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2007.
Autor
COIMBRA, Eliane Campos
Institución
Resumen
Os papilomavírus humanos infectam o tecido epitelial mucoso ou cutâneo provocando o
aparecimento de verrugas ou papilomas benignos que podem regredir ou evoluir para lesões
malignas. A infecção por HPV é a doença sexualmente transmissível mais freqüente do
mundo e está relacionada com a etiologia de certos tipos de cânceres, principalmente os
anogenitais. O câncer cervical é o segundo mais freqüente entre as mulheres do mundo e o
HPV-16 é o tipo mais encontrado, presente em 60% dos casos. Estudos para o combate da
infecção mostram que as vacinas baseadas em Virus-Like Particles (VLPs), formadas a partir
das proteínas capsidiais L1/L2 ou L1, induzem à produção de anticorpos neutralizantes que
conferem proteção contra o mesmo tipo viral. A imunidade humoral é direcionada contra os
epítopos conformacionais da proteína L1 que compõe 90% da estrutura capsidial. As VLPs
são obtidas através da expressão dos genes capsidiais em sistema de expressão heterólogo e
processos de purificação. A levedura Pichia pastoris é um sistema de expressão, eficiente e de
baixo custo para a produção de altos níveis de proteínas, além de apresentar vantagens em
relação a outros sistemas. Neste trabalho foi proposta a expressão do gene L1 de HPV-16 em
células da levedura P. pastoris, como base de uma estratégia vacinal para o controle do câncer
de colo de útero. O gene L1 de HPV-16 foi clonado em vetor de expressão pPICZA e a
construção pPICZL1H16 foi integrada no genoma de Pichia. A transcrição do gene L1 foi
confirmada por meio de RT-PCR e a expressão da proteína, por imunodetecção em Dot Blot.
A obtenção dos clones de P.pastoris que expressam a proteína L1 de HPV-16, permitirá o
desenvolvimento de mais uma estratégia vacinal baseada em VLPs