masterThesis
Produção da proteína L1 do Papilomavírus bovino tipo 1 em Pichia pastoris
Registro en:
Luiz Santos de Jesus, André; Carlos de Freitas, Antonio. Produção da proteína L1 do Papilomavírus bovino tipo 1 em Pichia pastoris. 2008. Dissertação (Mestrado). Programa de Pós-Graduação em Genética, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2008.
Autor
JESUS, André Luiz Santos de
Institución
Resumen
Os papilomavírus são conhecidos por causarem lesões tumorais, geralmente benignas, em
tecidos epiteliais de diversos organismos, que podem sob condições adequadas progredirem
para o câncer. O papilomavírus bovino (BPV) tem sido amplamente caracterizado tanto por
ser considerado um modelo experimental para o estudo do papilomavírus humano (HPV),
quanto por sua grande importância na bovinocultura. Estudos para o combate da infecção
mostram que vacinas baseadas em virus-like particles (VLPs), formadas a partir das proteínas
capsidiais L1/L2 ou L1, induzem à produção de anticorpos neutralizantes conferindo proteção
contra o mesmo tipo viral. A levedura Pichia pastoris é um sistema de expressão eficiente e
de baixo custo para produção de altos níveis de proteínas, além de apresentar vantagens em
relação a outros sistemas. Neste trabalho foi avaliado a possibilidade do uso do sistema de
expressão heteróloga baseado em células da levedura P. pastoris para a produção da proteína
L1 do capsídeo do papilomavírus bovino tipo 1. O gene L1 foi amplificado por PCR a partir
do genoma completo de BPV 1, clonado no vetor pGEM-T Easy e subclonado sob a
regulação do promotor AOX1 e em fase de leitura com uma cauda de poli-histidina presentes
no vetor pPICZA. As células da levedura foram transformadas com a construção
pPICZAL1B1 e os recombinantes resistentes a zeocina foram selecionados para expressão da
proteína L1. Estes foram cultivados em frascos contendo meio com glicerol como fonte de
carbono e após 48 horas o meio foi trocado por outro contendo 0,5% de metanol. A cada 24
horas foi adicionado metanol para uma concentração final de 2%, até completar 96 horas. Os
resultados obtidos mostraram que os recombinantes P. pastoris transformados com o cassete
de expressão pPICZAL1B1, após indução com metanol, foram capazes de expressar o gene
L1 e de produzir a proteína L1 de BPV 1. Tais transformantes permitirão o estabelecimento
de um sistema de expressão da proteína L1 e conseqüente produção de VLPs como primeiro
passo para implementação de uma estratégia vacinal contra infecções por papilomavírus