| dc.description | Bromelina é o nome genérico dado ao grupo de enzimas proteolíticas encontrada nos
vegetais da família Bromeliaceae, da qual o abacaxi é o mais conhecido e rico nesta
protease, que tem grande importância na área de saúde e de alimentos. O objetivo deste
trabalho foi determinar as propriedades físico-químicas e purificar a bromelina presente
no Ananas comosus L. Merril (abacaxi). A Diálise seguida da precipitação com 80% de (NH
4
)
2
SO
4
realizado no extrato do abacaxi proporciou uma maior recuperação de atividade e proteína produzindo um fator de purificação cerca de 3 vezes. O CE e o
CED80% apresentaram valores de pH ótimos de 8,5 e 7,2, respectivamente. Entretanto a bromelina foi estável em todos os valores de pH testados (5,0-9,0) mostrando assim ser formada por diferentes frações proteolíticas. Em relação à temperatura ótima, o CE e o
CED80% apresentaram valor de 50ºC e foram foram estáveis até temperaturas de 60 ºC, sendo totalmente desnaturada a 80ºC após 30 minutos. Os valores de K
M
e V
max aparentes, calculados segundo modelo de Lineweaver-Burk, foram: para azocaseína - K
M
= 2,48 mg/ml e V
max = 35,29 U/mL e para azoalbumina - K
M
= 2,94 mg/ml e V
max =
11,11 U/mL, mostrando assim praticamente a mesma afinidade por ambos os substratos.
Entretanto a eficiência catalítica foi maior para azocaseína que para azoalbumina (31,62
e 8,39 min
-1
, respectivamente). Através da eletroforese em gel SDS-PAGE, o extrato
bruto apresentou 4 bandas de proteínas com massas moleculares de 40, 29 e 27 kDa e uma inferior a 14 kDa. Através de zimograma as bandas de 29 e a abaixo de 14kDa apresentaram atividade caseinolítica. A Cromatografia de gel-filtração apresentou 2
picos, entretanto apenas o pico 2 com atividade proteolítica especifica de 116 U/mg de proteína e purificação de 25,1 vezes, o qual apresentou 2 bandas de 29 e 26 kDa em gel SDS-PAGE. Pico 2 este quando aplicado na cromatografia de troca aniônica, rendendo
um maior pico (P1) com atividade proteolítica o qual apresentou banda única em SDS-
PAGE de 29 kDa com atividade caseinolítica comprovada em zimograma | |
