Tesis
Desenvolvimento de uma técnica imunoenzimática (ELISA) quantitativa para a pesquisa de anticorpos IgG anti-DNA nativo (DNAds) no lúpus eritematoso sistêmico
Development of a quantitative enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of anti-double-stranded (ds) DNA IgG antibodies in systemic lupus erythematosus
Registro en:
CAVALCANTE, Elisângela de Oliveira Ribeiro. Desenvolvimento de uma técnica imunoenzimática (ELISA) quantitativa para a pesquisa de anticorpos IgG anti-DNA nativo (DNAds) no lúpus eritematoso sistêmico . 2017. 1 recurso online (114 p.). Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP.
Autor
Cavalcante, Elisângela de Oliveira Ribeiro, 1992-
Institución
Resumen
Orientador: Cláudio Lúcio Rossi Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O lúpus eritematoso sistêmico (LES) é uma doença autoimune crônica caracterizada pela produção de anticorpos direcionados a uma grande variedade de componentes da própria pessoa, incluindo antígenos intracelulares do núcleo celular. A detecção de anticorpos contra o DNA nativo (ds) é um dos critérios de classificação para o diagnóstico do LES. O presente estudo teve como objetivo desenvolver uma técnica imunoenzimática (ELISA) quantitativa para a detecção de anticorpos IgG anti-DNAds. O desempenho da técnica ELISA foi comparado com o teste de imunofluorescência indireta com Crithidia luciliae (CLIFT) como referência. Anticorpos IgG anti-DNAds foram pesquisados por ELISA e CLIFT em amostras de soros de 127 pacientes com LES, 56 pacientes com outras doenças e 37 pessoas sadias. A técnica ELISA apresentou sensibilidade de 92,9% e especificidade de 94,6%, enquanto a sensibilidade e especificidade da técnica CLIFT foram de 85,8% e 100%, respectivamente. O teste Q de Cochran foi utilizado para comparar as sensibilidades e especificidades das reações (diferenças entre os resultados foram consideradas significantes quando p ? 0,05). De acordo com a análise estatística, a técnica ELISA apresentou sensibilidade significativamente maior do que a obtida com a técnica CLIFT (p=0,0027), enquanto a técnica CLIFT apresentou especificidade significativamente maior do que a obtida com a técnica ELISA (p=0,0253). A técnica ELISA também pode ser utilizada para determinar a avidez dos anticorpos IgG anti-DNAds. Os índices de avidez desses anticorpos em 15 amostras de soros de pacientes com LES, selecionadas aleatoriamente, variaram de 58,5% a 96,9%. A técnica ELISA para a pesquisa de anticorpos IgG anti-DNAds desenvolvida nesse estudo apresentou ótimos resultados em termos de sensibilidade e especificidade, podendo ser útil em pesquisa e rotina diagnóstica Abstract: Systemic lupus erythematosus (SLE) is a chronic systemic autoimmune disease characterized by the production of antibodies to a large variety of self-components, including intracellular antigens of the cell nucleus. The detection of anti-double-stranded (ds) DNA antibodies is part of the classification criteria for diagnosing SLE. In this study, a quantitative enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of anti-dsDNA IgG antibodies was developed. The performance of the ELISA was compared with the Crithidia luciliae indirect immunofluorescence test (CLIFT) as a reference. Anti-dsDNA IgG antibodies were screened by ELISA and CLIFT in serum samples from 127 patients with SLE, 56 patients with other diseases and 37 healthy persons. The ELISA had a sensitivity of 92.9% and specificity of 94.6%, whereas the sensitivity and specificity of the CLIFT were 85.8% and 100%, respectively. The Cochran Q test was used to compare the sensitivities and specificities of the reactions (differences among results were considered significant when p ? 0.05). Based on the statistical analysis, the ELISA had a significantly greater sensitivity than the CLIFT (p=0.0027), whereas the CLIFT had a significantly greater specificity than the ELISA (p=0.0253). This assay may also be used to determine the avidity of anti-dsDNA IgG antibodies. The avidity indices of these antibodies in serum samples from 15 randomly selected patients with SLE ranged from 58.5% to 96.9%. The ELISA for the detection of anti-dsDNA IgG antibodies developed in this work showed excellent results in terms of sensitivity and specificity and could be useful in research and routine diagnostics Mestrado Ciencias Biomedicas Mestra em Ciências Médicas 159591/2015-5 CNPQ