Orientador: Francisco Humberto Nociti JuniorTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: O objetivo deste trabalho foi investigar a influência do fator idade sobre o comportamento e expressão gênica de células do ligamento periodontal (CLPD), e quais alterações o tratamento com fator de crescimento básico de fibroblastos (bFGF) pode induzir nestas populações celulares. Culturas primárias de CLPD foram obtidas e divididas nos seguintes grupos experimentais: A ¿ inclusos (células obtidas de terceiros molares inclusos de voluntários entre 18 e 30 anos de idade), B ¿ jovens (células obtidas de pré-molares erupcionados de voluntários entre 15 e 20 anos de idade), C ¿ idosos (células obtidas de dentes erupcionados de voluntários acima de 60 anos de idade), D ¿ grupo A submetido ao tratamento com 10?g/ml de bFGF, E ¿ grupo B submetido ao tratamento com 10?g/ml de bFGF e F ¿ grupo C submetido ao tratamento com 10?g/ml de bFGF. Foram realizados ensaios de proliferação e viabilidade celular, mineralização, quantificação dos níveis de proteína total e do padrão de expressão dos seguintes genes: Colágeno tipo I e III, metaloproteinase (MMP)-2 e -8, inibidor tecidual de metaloproteinase (TIMP)-1 e ¿2, fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF)-1, proteína morfogenética óssea (BMP)-3, bFGF, osteoprotegerina (OPG), receptor ativador do fator nuclear kß ligante (RANKL), interleucina (IL)-1ß, IL-4, IL-6, IL-8 e receptor de fator de crescimento de fibroblasto (FGFR) 1 por meio da técnica de ¿real-time¿ PCR (PCRq). A análise dos resultados demonstrou que a idade diminuiu a taxa de proliferação celular e a formação de nódulos minerais (P<0,05), enquanto que não se observou efeito significativo da idade sobre a viabilidade celular e quantidade total de proteína secretada (P>0,05). Já na análise de expressão gênica observou-se que a idade diminuiu significativamente os níveis de RNAm para colágeno tipo I e IL-4, enquanto que para os genes FGFR1, MMP-8, TIMP-1, OPG e IL-1ß e 6, observou-se um aumento nos níveis de RNAm (P<0,05). O tratamento com 10?g/ml de bFGF aumentou a taxa proliferativa em todos os grupos (P<0,05), entretanto com menor intensidade nas células de idosos (P<0,05). Já a formação de nódulos minerais foi inibida pelo fator crescimento em todos os grupos experimentais (P<0,05), enquanto que a viabilidade celular e quantidade total de proteína secretada não foram afetadas (P>0,05). Na avaliação do padrão de expressão gênica, os resultados demostraram que o tratamento com bFGF, diminuiu nos níveis de RNAm para todos os genes (P<0,05), com excessão da TIMP-1 e IL-8 que aumentaram (P<0,05), BMP-3 que aumentou nas células de jovens e diminui nas células de idosos (P<0,05), e PDGF-1 que não foi afetada (P>0,05). Dentro dos limites do estudo, podemos concluir que: i) foi possível estabelecer culturas primárias de células do ligamento periodontal obtidas de pacientes jovens e idosos, ii) a idade pode modular propriedades importantes das CLPD, diminuindo seu potencial de regeneração de estruturas minerais além de exacerbar características pró-inflamatórias e de degradação da matriz extracelular e iii) o tratamento com 10?g/ml de bFGF induz alterações similares no comportarmento de CLPD independentemente da idade do doadorAbstract: The aim of this study was to investigate the effect of aging on periodontal ligament cells (PDLC), modulated by the treatment with bFGF. Primary periodontal ligament cell cultures were obtained and divided into the following experimental groups: A ¿ impacted (cells from impacted molars from subjects aged 18 to 30 years), B ¿ young (cells from erupted pre-molars from subjects aged 15 to 20 years), C ¿ aged (cells from erupted teeth from patients aged more than 60 years), D ¿ group A treated with 10?g/ml of bFGF, E ¿ group B treated with 10?g/ml of bFGF and F ¿ group C treated with 10?g/ml of bFGF. For all groups, we performed proliferation and cell viability assays, mineralization assay, total protein quantification and assessed mRNA levels of: type I and III collagen, MMP-2 e -8, TIMP-1 e ¿2, PDGF-1, BMP-3, bFGF, OPG, RANKL, IL-1, IL-4, IL-6, IL-8 and FGFR 1 utlizing the ¿real-time¿ PCR technique. Data analysis demonstrated that aging negatively influenced cell proliferation and mineral nodule formation (P<0.05), while cell viability and total protein secretion were not affected (P>0.05). Gene expression analysis revealed that aging decreased mRNA levels of collagen type I and IL-4, and increased mRNA levels of FGFR1, MMP-8, TIMP-1, OPG and IL-1 and 6 (P<0.05). Treatment with 10?g/ml of bFGF significantly increased cell proliferation for all groups (P<0.05), however with a less impact on aged cells (P<0.05). In addition, cell viability and total protein secretion were not affected by bFGF (P>0.05), while mineral nodule formation was significantly inhibited (P<0.05). Finally, gene expression analysis demonstrated that bFGF decreased mRNA levels of all genes (P<0.05), except for TIMP-1 and IL-8 that were increased (P<0.05), PDGF-1 that was not affected (P>0.05) and BMP-3 that was increased in young cells and decreased in aged cells (P<0.05). Within the limits of our study, we may conclude that: i) it was possible to esblish primary cultures of PDLC obtained from young and aged donors, ii) aging modulates important features of periodontal ligament cells (PDLC), decreasing the potential for regeneration of mineralized tissues and favoring a pro-inflammatory and degenerative profile and iii) treatment with 10?g/ml of bFGF leads to similar PDLC behavioral alterations despite of the donor ageDoutoradoPeriodontiaDoutor em Clinica Odontologica