Tesis
Caracterização da microbiota e efeito do preparo químico-mecânico e da medicação intracanal na redução de microrganismos, endotoxinas e citocinas pró-inflamatórias em dentes com insucesso do tratamento endodôntico e presença de lesão periapical
Characterization of microbiota and effect of chemo-mechanical preparation and intracanal medication in reducing microrganisms, endotoxins and proinflammatory cytokines in root-filled teeth persistent infection failure and the presence of apical periodontitis
Registro en:
Autor
Barbosa-Ribeiro, Marlos 1986-
Institución
Resumen
Orientadores: Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes, Caio Cezar Randi Ferraz Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: O conhecimento da comunidade microbiana e do seu potencial antigênico é importante para o entendimento da patogênese da periodontite apical em dentes endodonticamente tratados. Os objetivos do presente estudo foram: 1) Caracterizar a microbiota associada ao insucesso endodôntico através do teste bioquímico, Nested PCR e sequenciamento parcial do gene 16S rRNA; 2) Quantificar endotoxinas (LPS) por meio do teste Limulus Amebocyte Lysate (LAL) e citocinas pró-inflamatórias IL-1?, IL-1?, TNF-? e PGE2 através do ensaio imunoenzimático (ELISA), correlacionando-as com aspectos clínicos e radiográficos dos pacientes; 3) Avaliar o efeito do preparo químico-mecânico (PQM) e medicação intracanal (MIC) na redução de microrganismos, LPS e de citocinas pró-inflamatórias. Foram coletadas amostras do conteúdo endodôntico de 20 dentes unirradiculares antes (C1), após o PQM (C2), após o uso de EDTA 17% (C3) agitado com ultrassom, e após a MIC (C4). Utilizaram-se materiais estéreis e/ou apirogênicos e técnicas assépticas durante as coletas. Após o processamento laboratorial das amostras, os dados foram tabulados e analisados pelos testes estatísticos Qui-quadrado, Correlação de Spearman e ANOVA (Tukey-Kramer). Os resultados apontaram a presença de uma microbiota mista contendo bactérias Gram positivas e Gram negativas. Quatro diferentes filos foram identificados: Actinobacteria, Firmicutes, Fusobacteria e Proteobacteria. Enterococcus faecalis foi a espécie mais prevalente, identificada fenotipicamente (19/158) e genotipicamente (42/158). O sequenciamento conseguiu identificar 10,12% das amostras em nível de gênero e 89,88% em nível de espécie, enquanto que o teste bioquímico identificou 13,29% e 51,26%, respectivamente. As bactérias mais prevalentes identificadas por Nested PCR foram: Enterococcus faecalis (97,5%), seguido de Porphyromonas gingivalis (88,75%), Fusobacterium nucleatum (56,25%) e Aggregatibacter actinomycetemcomitans (37,5%). O PQM reduziu bactérias em 96,69% (p<0,05), com percentual de redução para Clorexidina (CLX) 2% gel em 99,3% e para NaOCl 6% em 92,1% (p>0,05). O EDTA 17% somente mostrou efeito complementar na redução bacteriana no grupo do NaOCl 6% (p<0,05). Apenas a CLX 2% gel foi efetiva na redução de endotoxinas comparado ao NaOCl 6% e EDTA 17% (P<0,05). O PQM, independentemente da substância química utilizada, foi efetivo na redução dos níveis das citocinas pró-inflamatórias Il-1? (88,14%), Il-1? (89,33%), TNF-? (89,85%) e PGE2 (48,60%) (p<0,05). A MIC não mostrou efeito aditivo na redução de bactérias e citocinas pró-inflamatórias em ambos os grupos (p<0,05); e somente apresentou ação sobre LPS no grupo Ca(OH)2 + CLX 2% gel (p<0,05). Houve correlação positiva ente bactérias, LPS, citocinas pró-inflamatórias e os aspectos clínicos e radiográficos dos pacientes (P<0,05). Conclui-se que o PQM apresentou efeito significante na redução do conteúdo infeccioso de canais radiculares de dentes com insucesso do tratamento endodôntico, enquanto que a MIC não mostrou efeito aditivo significante na redução desses níveis Abstract: The knowledge of the microbial community and its antigenic potential is important for understanding the pathogenesis of apical periodontitis in endodontically treated teeth. The objectives of this study were: 1) Characterize the microbiota associated to endodontic failure through the biochemical test, Nested PCR and partial sequencing of gene 16S rRNA.; 2) Quantify endotoxin (LPS) by Limulus Amebocyte Lysate test and pro-inflammatory cytokines IL-1?, IL-1?, TNF-? and PGE2 by enzyme-linked immunosorbent assay, correlating them with the patients' clinical and radiographic features; 3) To evaluate the effect of chemo-mechanical preparation (CMP) and intracanal medications (ICM) in reducing microorganisms, LPS and pro-inflammatory cytokines. Samples of endodontic content of 20 single-rooted teeth were collected before (C1), after CMP (C2), after the use of 17% EDTA (C3) agitated with ultrasound, and after ICM (C4). Sterile/apyrogenic materials and a aseptic techniques were used during the samples' collection. After processing the samples, the data were tabulated and analyzed by statistical testes Chi-square, Spearman correlation, and analysis of variance (Tukey-Kramer). The results indicated the presence of a mixed microbiota presenting Gram positive and Gram negative bacteria. Four different phyla were identified: Actinobacteria, Firmicutes, Proteobacteria and Fusobacterium. Enterococcus faecalis was the most prevalent species, identified phenotypically (19/158) and genotypically (42/158). Sequencing was able to identify 10.12% of the samples at the genus level and 89.88% at the species level, whereas the biochemical test identified 13.29% and 51.26%, respectively. The most prevalent bacteria by Nested PCR were: Enterococcus faecalis (97.5%), followed by Porphyromonas gingivalis (88.75%), Fusobacterium nucleatum (56.25%) and Aggregatibacter actinomycetemcomitans (37.5%). CMP reduced bacteria in 96.69% (p<0.05), with a percentage reduction in 99.3% for 2% CLX gel and in 92.1% for 6% NaOCl (p>0.05). EDTA 17% showed only a further effect on bacterial reduction in the 6% NaOCl group (p<0.05). Only 2% CLX gel was effective in reducing endotoxin compared to 6% NaOCl and 17% EDTA (p<0.05). CMP regardless of chemical substance used, was effective in reducing the levels of pro-inflammatory cytokines IL-1? (88.14%), IL-1? (89.33%), TNF-? (89.85%) and PGE2 (48.60%) (p<0.05).The intracanal medication not show additive effect in reducing bacteria and proinflammatory cytokines in both groups (p<0.05); and only presented action against LPS in the Ca(OH)2 + 2% CLX gel group (p<0.05). There was a positive correlation between bacteria, LPS, pro-inflammatory cytokines and clinical and radiographic features (p<0.05). In conclusion, CMP presented a significant effect in reducing the infectious content of root canal of teeth with endodontic failure, while ICM showed no significant additive effect in reducing these levels Mestrado Endodontia Mestre em Clínica Odontológica