La relación simbiótica entre hongos y raíces de orquídeas es de gran importancia en la nutrición y germinación de sus semillas. Aunque los hongos micorrízicos están presentes en casi todas partes del mundo, ciertas actividades humanas, como la deforestación y expansión de la frontera agrícola, pueden dar lugar a suelos o sustratos desprovistos de hongos beneficiosos o disminuir su abundancia. En ausencia o deficiencia de estos hongos micorrízicos, la germinación y crecimiento de las plantas podrían verse seriamente afectados. El objetivo de esta investigación fue aislar y purificar hongos potencialmente micorrízicos presentes en las raíces de seis especies de orquídeas nativas del Cantón Gualaceo, provincia del Azuay. El muestreo se realizó en los meses de julio y agosto del 2016, en la parroquia Remigio Crespo Toral (Gulag) en las orillas del Río San Francisco a una altura de 2.525 msnm. Las especies de orquídeas con las que se trabajaron fueron: Pleurothallis angustipetala, Elleanthus oliganthus, Trichoceros anteniferum, Oncidium aureum, Pleurothallis gramínea, Epidendrum secundum. Se siguió la metodología propuesta por Zettler (2013), para el procesamiento de las muestras y posterior aislamiento de las colonias. Se recolectaron 10 fragmentos de raíces con una longitud comprendida entre 5 – 10 cm. El muestreo se realizó por duplicado. Se logró aislar y purificar seis hongos potencialmente micorrízicos pertenecientes al género Tulasnella. El mayor porcentaje de este tipo de hongos fue aislado de raíces pertenecientes a las especies Pleurothallis angustipetala, Pleurothallis gramíneayEpidendrum secundum. La identificación de los hongos aislados será confirmada por amplificación y secuenciación de regiones específicas del ADN fúngico, lo cual corresponde a la siguiente fase dentro del proyecto “Estudio de la relación simbiótica orquídea-micorriza en la provincia del Azuay, Ecuador" que se realiza en el orquideario de la Universidad de Cuenca.The symbiotic relationship between fungus and orchid’s roots is of great importance for the nutrition and germination of these plants. Although mycorrhizal fungi occur almost everywhere in the world, human activities such as deforestation and agricultural frontier expansion, can result in soils or substrates lacking a beneficial fungipopulation or decreased fungi abundance. In the absence or deficiency of these mycorrhizal fungi, the plants growth could be inadequate. The aimof this research was to isolate and purify potentially mycorrhizal fungi present in roots of six native orchids species of Canton Gualaceo, province of Azuay. The sampling was performed in july and august 2016, in the Remigio Crespo Toral parish(Gulag) at the banks of the San Francisco River, 2.525 meters above the sea level (m.a.s.l). The orchids species used in this work were: Pleurothallis angustipetala, Elleanthus oliganthus, Trichoceros anteniferum, Oncidium aureum, Pleurothallis gramínea, Epidendrum secundum. Sample processing and subsequent colonies isolation was performed following the methodology proposed by Zettler (2013).Ten root fragments were collected, which length varied between 5 – 10 cm. The sampling was performed in duplicate. It was possible to isolate and purify six potentially mycorrhizal fungi belonging to the genus Tulasnella. The highest percentage of these kinf of fungi were isolated from roots belonging to the species Pleurothallis angustipetala, Pleurothallis gramínea and Epidendrum secundum. The identification of the isolated fungiwill be confirmed by the amplification and sequencing of specific DNA regions, which is the next step in the project "Study of the symbiotic orchid-mycorrhiza relationship in the province of Azuay, Ecuador” carried out in the orchid garden of the University of Cuenca.Bioquímico FarmacéuticoCuenca