Se estableció un protocolo óptimo para introducción en cultivo in vitro de las especies endémicas en peligro de extinción: Phaedranassa schizantha y Phaedranassa tunguraguae, en el Laboratorio de Biotecnología Vegetal - Facultad de Recursos Naturales–ESPOCH. Se realizó una revisión bibliográfica de estudios realizados sobre la Familia Amaryllidaceae. Se procedió a la localización y toma de muestras vegetales en las ciudades de Riobamba (P. schizantha) y Baños (P. tunguraguae). Posteriormente, la desinfección del material vegetal partió con un enjuague con agua de grifo, seguido del corte de: tallos, hojas y raíces. Los bulbos obtenidos fueron sumergidos en diversas soluciones para garantizar una desinfección adecuada, en el siguiente orden: jabón líquido (10%), etanol (70%), Benomyl® (10%), NaClO (3%) y Tween® 20. El medio basal (MB) constituido de Medio Murashigue&Skoog (4,32 g/L), Sacarosa (30 g/L), Agar (10 g/L) y ajustado a pH 5,6. Se utilizaron 4 tratamientos (T0, T1, T2, T3) con 15 repeticiones (P. schizantha) y 10 repeticiones (P. tunguraguae), respectivamente. El tratamiento control (T0) constituido por MB; T1: MB + BAP 0,5 ppm + ANA 0,1 ppm; T2: MB + BAP 1 ppm + ANA 0,1 ppm; y T3: MB + BAP 1,5 ppm + ANA 0,1 ppm. En cabina de flujo laminar y técnica de twin-scale fueron obtenidos los explantes, que fueron sembrados e incubados durante 45 días, 16/8 horas de fotoperiodo, temperatura (25ºC±1) y humedad (70%±1). Mediante evaluación cualitativa se observó que el T3 presentaba mejor respuesta en longitud y tamaño de hojas, así como en número y diámetro de bulbillos. A través del Método de Diseño de Componentes Principales, se determinó que el T3 (BAP 1,5 ppm + ANA 0,1 ppm) constituye el procedimiento óptimo para la introducción en cultivo in vitro, para ambas especies. Se recomienda al momento de realizar los cortes de los explantes y la siembra de los mismos, tener las suficientes medidas de asepsia, con el fin de prevenir las contaminaciones de hongos y/o bacterias y obtener cultivos axénicos.It was established optimal protocol for the in vitro cultivation of endemic species in danger of extinction: Phaedranassa schizantha and Phaedranassa tunguraguae, at the vegetal Biotechnology Laboratory-Natural Resources Faculty-ESPOCH. A literature review of studies was conducted about the Amaryllidaceae Family. Planting and sampling were carried out in the cities of Riobamba (P. schizantha) and Baños (P. tunguraguae). Later, the disinfection of the vegetal material departed with a rinse with tap water, followed buy the cut of: steams, leaves and roots. The resulting bulbs were immersed in various solutions in order to ensure adequate disinfection in the following order: liquid soap (10%), ethanol (70%), Benomyl® (10%), NaClO (3%) and Tween® 20. The basal medium (MB) consisting of Murashigue & Skoog medium (4,32 g/L), Sacarosa (30 g/L), Agar (10 g/L) and adjusted to pH 5,6. Four treatments (T0, T1, T2, T3) were used with 15 repetitions (P. schizantha) and 10 repetitions (P. tunguraguae), respectively. The control treatment (T0) constituted by MB; T1: MB + BAP 0,5 ppm + ANA 0,1 ppm; T2: MB + BAP 1 ppm + ANA 0,1 ppm; y T3: MB + BAP 1,5 ppm + ANA 0,1 ppm. In the laminar flow cabin and the twin-scale technique, the explants were obtained which were harvested and incubated during 45 days, 16/8 hours of photoperiod, temperature (25ºC±1) and humidity (70%±1). By means of a qualitative evaluation, it was observed that the T3 presented better response in length and size of leaves, as well as in number and diameter of bulbillos. Through the Principal Component Design Method, was determined that T3 (BAP 1,5 ppm + ANA 0,1 ppm) constitutes the optimal procedure for in vitro cultivation, for both species. It was recommended at the moment of cutting the explants and planting them, to have sufficient measures of asepsis, in order to prevent the contamination of fungus and/ or bacterium and obtain axenic cultivation.