La presente investigación se realizó en el Laboratorio de Cultivo de Tejidos del Centro Bioforesta-ESPOCH, planteando: evaluar métodos de desinfección y medios de cultivo para la multiplicación in vitro de guarango (Caesalpiniaspinosa Mol. O. Kuntz); en la fase de introducción se utilizó yemas apicales y yemas axilares provenientes de campo e invernadero, se realizó desinfecciones con cloro comercial (5,25% de NaOCl) y alcohol potable a 90° en diferentes tiempos y concentraciones. Los brotes obtenidos en la primera fase se segmentaron en micronudos de 0,5 a 1 cm. portando ya sea una yema apical o axilar, se sembró un explante por tubo de ensayo conteniendo los diferentes medios de cultivo. El mejor método de desinfección para explantes de invernadero fue Alcohol al 75% por 1 minuto, Cloro 75% por dos minutos y Cloro 30% por dos minutos, en estos tratamientos no hubo contaminación de los explantes y se obtuvo el 44% de supervivencia. Para explantes de campo la doble desinfección en cloro (60% por 1 minuto y 10% por 5 minutos) controló la contaminación y no genero daños en los tejidos de yemas apicales, mientras que para yemas axilares la desinfección con alcohol al 75% por un minuto y cloro al 75% por 7 minutos permitió disminuir la contaminación a 0% en el tratamiento T10 y 25% en el tratamiento T13. En la fase de multiplicación el medio MS con Vitaminas de Gamborg suplementado con 1,5 ppm de BAP y 1,5 ppm de Kinetina permitió la brotación de los explantes tanto en yemas apicales como en yemas axilares, además con este tratamiento se obtuvo mayor cantidad de brotes por explante.