La rotenona es un químico natural producido por plantas leguminosas, biogenéticamente relacionado con los isoflavonoides; es utilizada en la actualidad, en la agricultura, acuacultura, apicultura y en la ganadería. La selección del método para la cuantificación de rotenona se basó en el método oficial de la AOAC 983.06* (2007), que se valido en las condiciones del laboratorio del Departamento de Ciencia y Alimentos y Biotecnología (DECAB). Para validar el método se establecieron los siguientes parámetros: linealidad, sensibilidad, límite de detección y cuantificación, repetibilidad, rango de aplicación, porcentaje de recuperación, efecto matriz, robustez e incertidumbre. Estos parámetros se evaluaron siguiendo los procedimientos de la norma ISO 17025 (2005). Del proceso de validación se obtuvieron los siguientes resultados: el rango de linealidad fue de 0 a 0,393 mg/mL, la sensibilidad del método va en el orden de las variaciones de concentración de 0,001 mg/mL o 0,1 ppm, el límite de detección (LD) es de 0,000135 mg/mL, mientras que el límite de cuantificación (LC) es de 0,000450 mg/mL, en cuanto al porcentaje de recuperación se extiende entre 90,02 % para niveles bajos de concentración de rotenona y 98,21 % para niveles altos de concentración de rotenona, finalmente se puede decir que el método es robusto, no tiene efecto matriz y los resultados son reproducibles. Una vez validado el método, se realizó un diseño experimental para optimizar el proceso de extracción cruda de rotenona basados en el trabajo previo de Acuña 2008, el cual consideró las variables soluto/solvente y tiempo de maceración como variables de extracción. Se realizó todas las extracciones detalladas en el diseño, para posteriormente analizarlas en el HPLC, con el método previamente validado. Se cuantificaron las concentraciones de cada extracto y se analizaron los resultados estadísticamente con la ayuda del software STATGRAPHIPC, obteniendo los siguientes resultados: Las variables tiempo y relación soluto solvente en el proceso de extracción de rotenona son significativas, mas no así la interacción entre las dos variables. Por último, se determinó que en un tiempo de dos horas y una relación soluto solvente 1:4 son las condiciones óptimas de la extracción cruda de rotenona.Ruales Nájea, Jenny Cumanda