El tabaco es una planta perteneciente a la familia de las Solanáceas, originaria de Sur América. Se adapta a suelos ácidos y pesados, con poca materia orgánica, y se desarrolla muy bien en altas temperaturas. Es una planta muy importante para Latinoamérica, generando alrededor del 16% del PIB de la región e igualmente importante en la generación de empleos para las regiones del Caribe y América Central. El objetivo de esta investigación fue desarrollar un protocolo para la regeneración in vitro de Nicotiana tabacum variedad criollo Havanensis, por la vía de organogénesis directa a partir de láminas foliares; que sea la forma más económica y viable para realizar este procedimiento a escala comercial en Honduras. Se realizaron dos experimentos, en el primero se evaluaron dos concentraciones de hipoclorito de sodio (NaClO): 10% y 20% (v/v), con dos tiempos de exposición: 20 y 30 minutos, para determinar el tratamiento más económico y eficiente en la obtención de asepsia de los explantes de Nicotiana tabacum. En el segundo experimento se evaluó la auxina ácido naftalenacético (ANA) con dos concentraciones: 0.5 y 1.0 µM, y cuatro citocininas bencil aminopurina (BAP), 6 fulfuril adenina (Kinetina), zeatina y 2 isopentenil adenina (2iP) en dos concentraciones cada una: 5 y 10 µM, para un total de 16 tratamientos. Este experimento tenía como objetivo, determinar la interacción más efectiva de hormonas para la inducción directa de brotes adventicios a partir de explantes foliares de Nicotiana tabacum. Al final de la segunda semana, en el experimento de desinfección superficial se observó que el tratamiento de 10% de NaClO a 30 minutos, obtuvo la menor contaminación (2.2%), y fue significativamente diferente al tratamiento de 20% NaClO por 30 minutos (24.4%) con una probabilidad (P ≤ 0.05). Para el segundo experimento se tomó el peso seco de cada explante en la cuarta semana, se eliminó el peso de raíces y tejido callogénico para cuantificar la producción neta de brotes adventicios. Mediante el análisis de peso seco, se determinó que las citocininas utilizadas presentaron diferencias significativas entre ellas, donde el mayor peso seco de brotes adventicios (200 mg) se observó al utilizar BAP. No se observaron diferencias significativas al utilizar Kinetina y Zeatina (181 y 167 mg respectivamente). El menor peso seco de brotes adventicios se observó al utilizar 2iP (133 mg) (P ≤ 0.05).