Otro
Estudo peptídico e determinação do perfil de metabólitos de venenos de escorpiões da família buthidae: Tityus serrulatus, Tityus bahiensis e Tityus obscurus
Registro en:
000866946
33004137046P4
Autor
Dias, Nathalia Baptista
Resumen
Numerosos estudos produzidos nos últimos 30 anos, vêm elucidando estruturas e
atividades biológicas de vários componentes de venenos animais, demonstrando suas
complexas composições. Os venenos de escorpiões são misturas complexas de compostos
biologicamente ativos, tais como: compostos de baixa massa molar, peptídeos e proteínas,
sendo estas últimas as mais amplamente estudadas. Até então, pouco se conhece sobre os
pequenos peptídeos e metabolitos dos venenos de escorpiões, sendo necessárias pesquisas
para ampliar esse conhecimento. Este estudo visou a obtenção de um perfil peptídico
detalhado dos venenos das espécies T. serrulatus, T. bahienis e T. obscurus, com foco
principal nos pequenos peptídeos lineares, antes negligenciados em venenos de escorpiões. A
extração em acetonitrila 50 % (v/v) foi uma das diferenças estratégicas para esse objetivo, e a
separação e sequenciamento destes peptídeos foram realizados utilizando-se um sistema LCESI-
IT-TOF. Os componentes peptídicos dos venenos dos escorpiões estudados estão
distribuídos na faixa de massa molar de 400-4000 Da, sendo possível detectar a presença de
521 peptídeos distintos no veneno de T. serrulatus, 460 peptídeos no veneno de T. bahiensis e
517 peptídeos no veneno de T. obscurus. Também foi possível estabelecer os perfis peptídicos
dos venenos das três espécies estudadas, assim como obter a sequencia de 66 peptídeos, dos
quais alguns apresentaram semelhanças com toxinas já conhecidas de escorpiões. Treze dos
novos peptídeos detectados, contendo entre 6 e 19 aminoácidos, foram sintetizados e
caracterizados com relação às suas atividades biológicas em ensaios de antibiose, hemólise,
desgranulação de mastócitos, LDH, ensaio de campo aberto, dor e inflamação em mamíferos,
demonstrando algumas atividades principalmente com relação à hemólise, dor e locomoção
de mamíferos. Este trabalho também elucidou o perfil de metabólitos nestes venenos em um
sistema LCMS-Q-TOF-MS de maneira qualitativa e quantitativa. Para essa finalidade, foi
realizada a padronização das condições cromatográficas com utilização de cromatografia de
pareamento iônico para a melhor separação e identificação de compostos tais como aminas
biogênicas, poliaminas, aminoácidos, derivados de nucleosídeos, etc., detectados nos venenos.
A complexidade química demonstrada no presente trabalho corrobora com o fato de que as
moléculas pequenas, tanto peptídeos quanto metabólitos, deverão agir em sinergismo com as
grandes toxinas nos venenos, potencializando seus efeitos em vítimas de ferroadas por esses
animais. Numerous studies produced in the last 30 years, come elucidating structures and
biological activities of various components of animal venoms, showing their complex
compositions. The scorpion venoms are complex mixtures of biologically active compounds,
such as low molecular weight compounds, peptides and proteins, the latter being the most
widely studied. To the present time not much is known about the small peptides and
metabolites of scorpion venoms, requiring research to expand this knowledge. This study
aimed to obtain a detailed peptide profile of the venoms of T. serrulatus, T. bahienis and T.
obscurus species, focusing primarily on small linear neglected peptides in scorpion venom.
The extraction in 50% acetonitrile was one of the strategic differences for this purpose and the
separation and sequencing of these peptides were performed "on-line" using an LC-ESI-ITTOF
system. The peptide components of the scorpion venoms are distributed along the molar
mass range of 400-4000 Da, and in this study we could detect the presence of 521 different
peptides in T. serrulatus venom, 460 peptides in T. bahiensis and 517 in T. obscurus. It was
also possible to establish the peptide profiles of the venoms of the three species studied, as
well as to obtain the sequence of 66 peptides, some of which had similarities to known
already toxins of scorpions. Thirteen of the newly detected peptides, containing between 6
and 19 amino acids, were synthesized and characterized with proposal to obtain their
biological activities, such antibiosis, hemolysis, mast cell degranulation, LDH, open field test,
pain and inflammation in mammals, showing some particularly activities in hemolysis, pain
and mammals locomotion. This work also revealed the metabolites profile in these venoms
with a LCMS-Q-TOF-MS system for qualitative and quantitative analysis. For this purpose,
we standardized the chromatographic conditions with the use of ion pairing chromatography
to better separation and identification of compounds such as biogenic amines, polyamines,
amino acids, nucleosides derivatives, etc., detected in the venoms. The chemical complexity
demonstrated in this study corroborates with the fact that small peptides and metabolites
should act in synergism with large toxins in poisonings, increasing its effects on victims by
these animals. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)