Dissertation
Imunização de camundongos com fragmentos recombinantes de cinesina de Leishmania chagasi e/ou plasmídeos codificando IL-12 e IL-2 murinas
Fecha
2011Registro en:
TEIXEIRA, N. C. Imunização de camundongos com fragmentos recombinantes de cinesina de Leishmania chagasi e/ou plasmídeos codificando IL-12 e IL-2 murinas. 2011. 86 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa) - Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz, Salvador, 2011.
Autor
Teixeira, Naiara Carvalho
Institución
Resumen
Leishmaniose visceral zoonótica (LV) é uma doença que afeta homens e cães e é causada por
protozoários das espécies Leishmania infantum e Leishmania chagasi. O cão doméstico é o
principal reservatório do agente causal. Uma vacina efetiva contra a LV canina poderá
contribuir para o controle da infecção e/ou doença humana e canina. A resposta imune
protetora contra a LV canina é do tipo celular (Th1). Em nosso laboratório, dentre um grupo
de cinco antígenos recombinantes selecionados de uma biblioteca de cDNA de L. chagasi,
usando-se uma mistura de soro de cães naturalmente infectados e que exibiam resposta imune
humoral e celular específica, um fragmento da extremidade carboxila de uma cinesina com
cauda de 6 histidinas (rLci2B-NH6), para permitir a purificação, foi escolhido para a
avaliação do seu potencial como candidato a componente de uma vacina contra LV canina.
No presente trabalho foi avaliada a imunização de camundongos BALB/c com rLci2BNH6/
saponina em associação com os plasmídeos pcDNA3.1-scmu-IL-12 e/ou pcDNA3.1-
mu-IL-2. Os animais imunizados com rLci2B-NH6/saponina em associação com a IL-12 e/ou
IL-2 produziram anticorpos IgG, IgG2a e IgG1 específicos. Esplenócitos desses animais
exibiram proliferação, mas não produziram IFN-γ ou IL-5 após estimulação in vitro com
rLci2B-NH6. Esses resultados sugerem que a adição de pcDNA3.1-mu-IL-2 no protocolo de
imunização não é capaz de promover uma resposta imune predominantemente Th1. Também
foi avaliada a imunização de camundongos com proteína recombinante quimérica (rLci2-NTCT-
NH6) formada pelos domínios não repetitivos presentes nas extremidades amina e
carboxila codificadas pelo gene da cinesina. Camundongos BALB/c imunizados com rLci2-
NT-CT-NH6 ou uma proteína recombinante químerica controle, contendo 5 domínios
repetitivos presentes em rLci2B-NH6 entre os domínios não repetitivos de rLci2-NT-CTNH6,
apresentaram produção de IgG, IgG2a e IgG1. Esplenócitos desses animais exibiram
proliferação, mas não produziram IFN-γ e apenas esplenócitos dos camundongos imunizados
com rLci2-NT-5R-CT-NH6 sintetizaram IL-5, após estimulação in vitro com as respectivas
proteínas. Contudo, durante a purificação de rLci2-NT-CT-NH6 e rLci2-NT-5R-CT-NH6
ocorreu intensa proteólise que pode ter resultado na destruição de epítopos capazes de induzir
resposta Th1. Previamente, em nosso laboratório, foi observada a morte de alguns
camundongos injetados com 100 μg saponina/dose, por isso, doses menores de saponina (50
ou 25 μg) foram avaliadas como adjuvante na indução de resposta imune a rLci2B-NH6. Os
resultados da mensuração dos anticorpos foram semelhantes nos três grupos. Curiosamente,
somente esplenócitos do grupo injetado com 25 μg/dose exibiram proliferação específica. O
grupo injetado com 100 μg/dose produziu IFN-γ e IL-5 e o grupo injetado com 50 μg/dose
sintetizou IFN-γ, mas não produziu IL-5, após estimulação in vitro com rLci2B-NH6.