Dissertation
Produção de anticorpos IgY específicos para o vírus da hepatite A purificados de gema de ovo de frangas imunizadas e sua possível aplicação em diagnóstico do vírus no fígado
Fecha
2010Registro en:
VASCONCELOS, Gentil Arthur Lins Bentes Mendonça de. Produção de anticorpos IgY específicos para o vírus da hepatite A purificados de gema de ovo de frangas imunizadas e sua possível aplicação em diagnóstico do vírus no fígado. 2010. 121 f. Dissertação (Mestrado em Biologia Parasitária) - Fundação Oswaldo Cruz, Instituto Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2010.
Autor
Vasconcelos, Gentil Arthur Lins Bentes Mendonça de
Institución
Resumen
O interesse da literatura científica pela imunoglobulina Y (IgY) é crescente devido a
várias vantagens tais como: fácil obtenção, baixo custo, produção em larga escala e
método mais adequado quanto ao aspecto bioético. A IgY esta presente em aves e
répteis, sendo transferida do soro para a gema dos ovos desses animais através de
processo secretório. A produção de imunoglobulina IgY específica contra o vírus da
hepatite A se justifica na detecção do vírus da Hepatite A (HAV) em tecido hepático
em casos de hepatite fulminante sem diagnóstico definido, em ensaios
experimentais para preparação de novas vacinas para hepatite A e a possibilidade
de emprego como imunoterapia na prevenção da hepatite aguda pós-exposição ao
vírus. Cabe ressaltar que anticorpos anti-HAV atualmente comercializados têm baixa
afinidade e têm custo elevado. Nosso estudo consistiu em produzir anticorpos
específicos anti-HAV em frangas ISA Brown imunizadas e avaliar seu uso no
diagnóstico da hepatite A em tecido. METODOLOGIA: Vinte galinhas divididas em
cinco grupos (I-V) foram imunizadas com os seguintes inóculos: Grupo I – Vacina
comercial contra hepatite A e Oligodesoxinucleotídeos contendo C-fosfato-
guanosina (CpG-ODN); Grupo II – Vacina comercial contra hepatite A; Grupo III –
Vírus da Hepatite A, adjuvante incompleto de Freund (IFA) e CpG-ODN; Grupo IV –
Vírus da Hepatite A e IFA; Grupo V – IFA (controle). Os ovos foram coletados e
purificados pelo método de precipitação em polietileno glicol (PEG). A IgY foi
caracterizada e quantificada pelos métodos de ELISA, neutralização in vitro,
eletroforese e “Western Blotting”. A detecção do HAV em fígado foi realizada pelo
método de imunofluorescência indireta (IIF) com a IgY anti-HAV sendo utilizada
como anticorpo primário e IgG de cabra anti-IgY marcada com Alexa Fluor® 488
como anticorpo secundário. Para isto utilizamos amostras de fígado de primatas
não-humanos (macacos cynomolgus) infectados e não infectados com HAV, uma
amostra humana com hepatite fulminante de etiologia viral por hepatite A e uma
amostra humana com hepatite fulminante de etiologia não viral (controle). Os
anticorpos primários (IgY) utilizados foram purificados dos ovos dos grupos I e III, e o
anticorpo do Grupo V foi utilizado como controle. RESULTADOS E DISCUSSÃO:
Todas as aves imunizadas com antígeno HAV soro-converteram, e os anticorpos IgY
anti-HAV foram efetivamente transferidos para a gema dos ovos tendo a associação
dos adjuvantes IFA mais CPG-ODN se mostrado mais efetiva. Os métodos de
caracterização da IgY demonstraram especificidade ao antígeno HAV, contudo o
diagnóstico tecidual pela técnica da IIF apresentou excessiva marcação inespecífica,
necessitando de aprimoramento na técnica de purificação da imunoglobulina para
uso nesta finalidade.