Tesis Doctorado
Actividad de neuronas del raphe: efecto de nicotina perinatal.
Autor
Eugenín, Jaime
Torrealba, Fernando
Pontificia Universidad Católica de Chile
Institución
Resumen
A ratonas preñadas (1-7 días) se les implantó subcutáneamente una minibomba osmótica que le entregaba ditartrato de nicotina a una tasa de 60 mg
Kg- ' día- ' (expuestos a nicotina) hasta el final de la gestación. Los ratones controles y expuestos a nicotina de 1,3 ,5 y 8 días postnatales (Pl, P3, P5 y P8,
respectivamente) fueron puestos en una cámara de pletismografia con temperatura controlada. Se les permitió respirar aire espontáneamente durante
10 minutos, seguido de 10 minutos inhalando aire enriquecido con 10% CO2 (21% 02, N2-equilibrado). Los valores de volumen corriente, frecuencia respiratoria y
ventilación minuto fueron medidos durante las condiciones de normoxia e hipercarbia. Luego de una hora y media, los neonatos fueron anestesiados con
éter y perfundidos transcardíacamente con 4% de p-formaldehído y 0,0 1% de ácido pícrico. Sus cerebros fueron removidos, y fijados por 42 h en el mismo
fijador. A fin de determinar los efectos de la nicotina perinatal sobre la morfología y tamaño de las neuronas serotonmérgicas del raphe caudal y su activación en
respuesta al estímulo hipercárbico, se realizaron cortes en un crióstato y fueron procesados en inmunohistoquímica ariti-triptófano hidroxilasa (marcador
serotoninérgico) y anti-c-Fos (marcador de activación neuronal).
Además, usamos registros en Además, usamos registros en whole-cell en rebanadas de troncoencéfalo de ratón de neonatos P3 controles y expuesto a nicotina. De esta forma, estudiamos las propiedades electrofisiológicas pasivas y activas de las neuronas del raphe caudal y su respuesta al incremento de CO2 en el medio de superfusión.
Confirmamos que los neonatos P1-P5 expuestos a nicotina mostraron una respuesta reducida en volumen corriente y volumen minuto al inhalar aire
enriquecido con 10% CO2 (p <0,6001 ANOVA, de dos factores, factor nicotina).
Sin embargo, esta diferencia no se observó en los neonatos P8. Por otro lado, la exposición perinatal a nicotina no afectó los parámetros respiratorios en
condiciones de normoxia a ninguna edad estudiada.
El número de neuronas serotoninérgicas en el raphe caudal de neonatos P3 expuestos a nicotina fue menor que en los neonatos P3 controles (p < 0,05
ANOVA, post test Bonferroni). Además, en neonatos P3 expuestos a nicotina el número de neuronas c-Fos positivas en la región caudal no incrementó después
de la inha1ación de aire enriquecido con 10% c02 como en el caso de los controles de igual edad (p <0,05 ANOVA, post test Bonferroni). Más aún, los somata de las
neuronas serotoninérgicas del raphe caudal de los neonatos P5 y P8 expuestos a nicotina tuvieron áreas de menor tamaño que aquellas de los neonatos controles
de igual edad postnatal (p < 0,001 y p < 0,05, respectivamente. Kolmogorov Smirnov).